in vivoのマウスの網膜色素上皮（RPE）の2光子顕微鏡（TPM）および蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）

神経網膜と脈絡膜の間に位置する上皮細胞の単層である網膜色素上皮（RPE）は、網膜機能の維持に重要な役割を果たします。そのin vivoイメージングは​​、人間の目ではまだ技術的に挑戦的です。マウスの目では、2光子顕微鏡（TPM）を使用して強膜を介してRPEを調べる可能性があります。TPMは、最大数百マイクロメートルまでの深部組織の観察を可能にする2つの光励起非線形蛍光顕微鏡です。2つの光子の同時吸収は焦点面でのみ発生するため、TPMの空間分解能は非常に高く、共焦点顕微鏡で使用されるピンホールは必要ありません。TPMは、細胞レベルでの自己蛍光の観察を可能にするため、RPE細胞内/周辺の蛍光分子に関する新しい洞察を提供する可能性があります。TPMと蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）の組み合わせは、細胞と組織に関する情報の幅を拡大する可能性があります。蛍光寿命は蛍光強度と分子環境の変化とともに変化に依存しないフルオロフォア固有の特性です。したがって、フリムには、異なるフルオロフォアを区別し、フルオロフォアの環境の変化を示す可能性がある可能性があります。NADH（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）やFAD（フラビンアデニンジヌクレオチド）などのエネルギー代謝関連の細胞内フルオロフォアは、異なる分子環境でシフトする特徴的な蛍光寿命を示し、したがって、蛍光寿命は細胞エネルギーメタボリック状態を実現するために使用されています。これらの非ラベルイメージング方法は、形態学的側面と代謝的側面の両方で、in vivoおよびin vitroの研究に従事する機会を提供します。

Retinal pigment epithelium (RPE), a monolayer of epithelial cells located between the neural retina and the choroid, plays a significant role in the maintenance of retinal function. Its in vivo imaging is still technically challenging in human eye. With the mouse eye, there is a possibility to look into the RPE through the sclera using two-photon microscopy (TPM). TPM is a two photon-excited nonlinear fluorescence microscopy that enables the observation of deep tissues up to several hundred micrometers. Since the simultaneous absorption of two photons occurs only at the focal plane, spatial resolution of the TPM is quite high, such that pinhole as used in a confocal microscope is not necessary. TPM enables observation of autofluorescence at the cellular level, and thus may provide new insights into the fluorescent molecules in/around RPE cells.The combination of TPM with fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) may expand the breadth of information about cells and tissues. Fluorescence lifetime is a fluorophore-specific property, which is independent of fluorescence intensity and changes with the alteration of molecular environment. FLIM may have therefore the potentials to distinguish different fluorophores and to indicate the change in the environment of a fluorophore. Some energy metabolisms-related intracellular fluorophores, such as NADH (nicotinamide adenine dinucleotide) and FAD (flavin adenine dinucleotide), show characteristic fluorescence lifetimes that shift under different molecular environments, and thus their fluorescence lifetime have been used to indicate cell energy metabolic states. These nonlabeling imaging methods offer us the opportunity to engage in the study of the RPE in vivo as well as in vitro both in morphological as well as metabolic aspects.