軟骨形成の評価のためにトルイジンブルーの中染色体染色を適用する標準化された方法

目的：トルイジンブルーでの染色は、軟骨および軟骨形成分化組織の組織学的評価のための確立された手順です。カチオン性染料であるトルイジンブルー染色は、プロテオグリカンの硫酸塩基に対する親和性が高いため、組織内のプロテオグリカンを視覚化します。一般に、トルイジンブルーを使用した中菌染色は軟骨マトリックスを表し、陽性染色の程度がプロテオグリカンの量に対応することが一般に認められています。 設計：軟骨細胞または骨髄間質細胞の関節軟骨とペレットを、トルイジン青の標準化された染色手順で分析しました。 結果：本研究では、手順の詳細な説明および/または詳細な公開された方法への参照が提供されない限り、そのような仮定が無効である理由を説明します。これは、染色の特異性と強度が示されているように、染色溶液のpHに脱水の使用と染色時間に依存するためです。 結論：したがって、軟骨組織とプロテオグリカンの発達の評価のための簡単で単純な選択的染色技術を提供するトルイジンブルー染色のためのよく制御された標準化されたプロトコルを提案できます。この手順が使用されない場合、調査員は染色結果の妥当性の評価を可能にするために、染色プロトコルに関する十分な技術情報を提供する必要があります。

OBJECTIVES: Staining with toluidine blue is a well-established procedure for the histological assessment of cartilaginous- and chondrogenic-differentiated tissues. Being a cationic dye, toluidine blue staining visualizes proteoglycans in a tissue because of its high affinity for the sulfate groups in proteoglycans. It is generally accepted that metachromatic staining with toluidine blue represents cartilaginous matrix and that the degree of positive staining corresponds with the amount of proteoglycans. DESIGN: Articular cartilage and pellets of chondrocytes or bone marrow stromal cells were analyzed with a standardized staining procedure for toluidine blue. RESULTS: In the present study, we illustrate why such an assumption is invalid unless a detailed description of the procedure and/or reference to a detailed published method are provided. This is because the staining specificity and intensity depend, as we have shown, on the pH of the staining solution, the use of dehydration, and on staining time. CONCLUSIONS: We can, therefore, suggest a well-controlled standardized protocol for toluidine blue staining, which provides an easy and simple selective staining technique for the assessment of cartilage tissue and proteoglycan development in chondrogenic differentiation. If this procedure is not used, then investigators must provide sufficient technical information concerning the staining protocol to allow an assessment of the validity of the staining results.