2つのマンノース6リン酸受容体の細胞内移動：ゴルジ装置に戻る

中国のハムスター卵巣（CHO）細胞とマウスリンパ腫細胞株を使用して、215-kdおよび46 kdマンノース6-リン酸受容体のリサイクルをゴルジのさまざまな領域に研究して、受容体が最初に遭遇する部位を決定しました新しく合成されたリソソーム酵素。シアリルトランスフェラーゼ（トランスシスターネおよびトランスゴルジネットワーク）を含む最小のゴルジ体コンパートメントへの戻りを評価するために、細胞表面の受容体分子のオリゴ糖は4度Cで[3H]ガラクトースで標識されました。、両方の受容体上の[3H]ガラクトース残基を、約3時間のT1/2でシアル酸に置き換えました。他の糖タンパク質は、少なくとも8〜10倍遅いシアル酸を獲得しました。ガラクトシルトランスフェラーゼを含むトランスゴルジのチスターネーへの受容体の収益は検出できませんでした。アルファマンノシダーゼIを含むCIS/中ゴルジチットネアIに戻り、マンノシダーゼI阻害剤であるデオキシマンノジリマイシンを添加することにより、ゴルギのために亜塩化するオリゴサクチャチャチャチャーチャチャードレートになることになる[3H]マンノース標識糖タンパク質の最初の翻訳後の通過を加えて測定しました。-Mannosidase I.阻害剤を除去した後、ゴルジ複合体を通過する後続の通過を伴う初期ゴルジに戻り、オリゴ糖が高マンノースから複合型ユニットに変換されることを決定することにより測定しました。この変換は、受容体や他の糖タンパク質で非常に遅かった（T1/2約20時間）。ゴルジ装置を介して移動することなく、DMM感受性α-マンノシダーゼへの受容体およびその他の糖タンパク質の曝露は、これらのタンパク質からのマンノース残基の損失を測定することにより決定されました。この損失も遅かった。これらの結果は、両方のMAN-6-P受容体がシアリルトランスフェラーゼを含むゴルジコンパートメントに日常的に戻って、ゴルジ領域の他の領域をリサイクルしないことを示しています。トランスゴルジネットワークは、CHOおよびマウスリンパ腫細胞のリソソーム酵素ソートの主要な部位であると推測します。

We have used Chinese hamster ovary (CHO) cells and a murine lymphoma cell line to study the recycling of the 215-kD and the 46-kD mannose 6-phosphate receptors to various regions of the Golgi to determine the site where the receptors first encounter newly synthesized lysosomal enzymes. For assessing return to the trans-most Golgi compartments containing sialyltransferase (trans-cisternae and trans-Golgi network), the oligosaccharides of receptor molecules on the cell surface were labeled with [3H]galactose at 4 degrees C. Upon warming to 37 degrees C, the [3H]galactose residues on both receptors were substituted with sialic acid with a t1/2 approximately 3 hrs. Other glycoproteins acquired sialic acid at least 8-10 times slower. Return of the receptors to the trans-Golgi cisternae containing galactosyltransferase could not be detected. Return to the cis/middle Golgi cisternae containing alpha-mannosidase I was measured by adding deoxymannojirimycin, a mannosidase I inhibitor, during the initial posttranslational passage of [3H]mannose-labeled glycoproteins through the Golgi, thereby preserving oligosaccharides which would be substrates for alpha-mannosidase I. After removal of the inhibitor, return to the early Golgi with subsequent passage through the Golgi complex was measured by determining the conversion of the oligosaccharides from high mannose to complex-type units. This conversion was very slow for the receptors and other glycoproteins (t1/2 approximately 20 h). Exposure of the receptors and other glycoproteins to the dMM-sensitive alpha-mannosidase without movement through the Golgi apparatus was determined by measuring the loss of mannose residues from these proteins. This loss was also slow. These results indicate that both Man-6-P receptors routinely return to the Golgi compartment which contains sialyltransferase and recycle through other regions of the Golgi region less frequently. We infer that the trans-Golgi network is the major site for lysosomal enzyme sorting in CHO and murine lymphoma cells.