マウス肺微小血管内皮細胞の培養方法

肺微小血管内皮細胞（ECS）は、肺の肺胞ビス孔障壁に不可欠です。ECバリアの完全性は、急性呼吸困難症候群（ARDS）、肺炎、肺水腫などの重度の肺疾患で破壊されることが知られています。マウスは一般にこれらの疾患をモデル化するために使用され、マウスECの分離と培養に対するますます高い需要を決定します。さまざまなタイプのマウス細胞の培養用のプロトコルのかなりの数にもかかわらず、微小血管内皮細胞の分離は依然として困難な手順です。私たちの原稿では、in vitro研究のための分離マウス肺微小血管ECSのための段階的な洗練された洗練された洗練された方法を開発しました。血小板内皮細胞接着分子抗体を使用して細胞を分離し、細胞間接着分子-1、アセチル化-low密度リポタンパク質、および血管内皮（ve） - カドヘリンに対する抗体を有効にしました。さらに、Griffonia simplicifoliaおよびHelix pomatia（陰性対照）染色を使用して、これらの細胞の微小血管起源を確認しました。EC単層のバリア特性は、浮腫剤、リポ多糖、ノコダゾール、および既知のバリア保護剤、アデノシンおよびスフィンゴシン-1-リン酸塩を使用した電気細胞成績インピーダンス検知実験を行うことによって特徴付けられました。記載されている完全なプロトコルは、一貫した再現性のある結果を提供しました。

Pulmonary microvascular endothelial cells (ECs) are integral to the alveoli-capillary barrier of the lung. The EC barrier integrity is known to be disrupted in severe lung diseases such as acute respiratory distress syndrome (ARDS), pneumonia and pulmonary edema. Mice are commonly used to model these diseases, dictating an increasingly high demand for murine ECs isolation and culture. Despite the significant number of protocols for the culture of various types of murine cells, the isolation of microvascular endothelial cells remains a challenging procedure. In our manuscript we developed adetailed step-by-step refined method for isolation murine pulmonary microvascular ECs for in vitro studies. We separated cells using platelet endothelial cell adhesion molecule antibody and characterized ECs with antibodies against intercellular adhesion molecule-1, acetylated-low density lipoprotein, and vascular endothelial (VE)-cadherin. Further, we confirmed microvascular origin of these cells using Griffonia simplicifolia and Helix pomatia (negative control) staining. Barrier properties of EC monolayer were characterized by conducting electric cell-substrate impedance sensing experiments with the edemagenic agents, lipopolysaccharide and nocodazole, and known barrier-protective agents, adenosine and sphingosine-1-phosphate. The described complete protocol provided consistent and reproducible results.