[AngioStrongylus cantonensis、Costaricensis、vasorumの識別のためのマルチプレックスリアルタイムPCRテストの標準化]

はじめに：Angiostrongyliasisは、世界中に存在するAngiostrongylusネマトードによって引き起こされる病気です。人間と動物の健康に最も高い影響を与える感染症は、A。cantonensis、A。costaricensis、およびA. vasorumによって引き起こされます。ヒトの症状の臨床形態は、好酸球性髄膜炎および腹部の血管内菌症であり、犬の最も一般的な効果は心肺損傷です。これは、これらの寄生虫の仲介者であるアフリカのカタツムリのリサチャティナ・フリカの世界的な普及の結果として、新興疾患と見なされています。AngioStrongylus spp。のいくつかの診断方法。非特異的で、費用がかかり、あまり敏感ではありません。人間および動物のangiostrongyliasisを制御するための敏感で具体的でアクセスしやすい診断ツールを開発することが緊急です。 目的：QPCR複数テストを開発して、AngioStrongylusの3つの病原性種を識別します。 材料と方法：生体情報分析を通じて、プライマーとプローブの特異性を保証するために、AngioStrongylusゲノムのITS-2領域のシーケンスを選択しました。陽性対照として成人の寄生虫からDNAを抽出し、DNeasy Blood＆Tissue®キットを使用して幼虫から抽出しました。Master MixQuantitect®キットを使用して、SmartcyclerCepheid®Thermocyclerで定量的PCR反応を実施しました。人間、他の寄生虫、アフリカのカタツムリからのDNAがネガティブコントロールとして使用されました。 結果：陽性DNAコントロールのしきい値サイクル値は、AngioStrongylus cantonensisで21、A。costaricensisの場合は22、A。vasorumで31でした。ネガティブコントロールでは、しきい値サイクルはゼロでした。QPCRは2（100％）の増幅効率を示しました。 結論：複数のQPCRが、3つの臨床的に重要なAngioStrongylusの3つの種について標準化されました。

INTRODUCTION: Angiostrongyliasis is a disease caused by Angiostrongylus nematodes that is present worldwide. The infections with the highest impact on human and animal health are caused by A. cantonensis, A. costaricensis, and A. vasorum. Clinical forms of the disease in humans are eosinophilic meningitis and abdominal angiostrongyliasis, while the most common effect on dogs are cardiopulmonary damages. It is deemed as an emerging disease as the result of the global dissemination of the African snail Lissachatina fulica, an intermediary host of these parasites. The few diagnostic methods for Angiostrongylus spp. are unspecific, costly, and not very sensitive. It is urgent to develop a sensitive, specific and accessible diagnostic tool for the control of human and animal angiostrongyliasis. OBJECTIVE: To develop a qPCR multiple test to identify the three pathogenic species of Angiostrongylus. MATERIALS AND METHODS: Through a bio-informatic analysis, we selected a sequence of the ITS-2 region of the Angiostrongylus genome to guarantee the specificity of primers and probes. We extracted DNA from adult parasites as positive control, and from larvae using the DNeasy Blood&Tissue® kit. Quantitative PCR reactions were conducted on a Smartcycler Cepheid® thermocycler using a master mix QuantiTect® kit. DNA from human beings, other parasites and the African snail was used as negative control. RESULTS: The threshold cycle values for positive DNA controls were: 21 for Angiostrongylus cantonensis, 22 for A. costaricensis, and 31 for A. vasorum. In negative controls, the threshold cycle was zero. qPCR showed an amplification efficiency of 2 (100%). CONCLUSIONS: A multiple qPCR was standardized at the laboratory for three clinically significant species of Angiostrongylus.