さまざまなタイプのRNAと相互作用できるエキソソームにおけるRNA結合タンパク質の同定：RNAのエキソソームへのRBP促進輸送

エキソソームにパッケージ化されたRNAは、エキソソームシャトルRNA（esRNA）と呼ばれます。ただし、RNAのこのサブセット（ESRNA）をエキソソームに引き込むプレーヤーは、ほとんど不明のままです。RNA結合タンパク質（RBPS）は、RNAと複合体を作り、エキソソームの生合成中にエキソソームに輸送することにより、このメカニズムの主要なプレーヤーとして機能する可能性があると仮定しました。ここでは、細胞RNA種とエキソソーム-RNA種の両方とRNA-RBP複合体を形成することが示されたエキソソームに30 RBPの存在を示します。エキソソームへのRNA転移におけるこれらのRBPの関与を評価するために、エキソソーム（Hsp90AB1、XPO5、HNRNPH1、HNRNPM、HNRNPA2B1、およびMVP）で同定された6つのタンパク質をコードする遺伝子転写産物は、siRNAおよびサブサブエフェクトによって沈黙していました。。他のRBPと比較して、MVPの転写後サイレンシングにより、総ESRNAの有意な減少が観察されました。さらに、MVPのEsRNAによる結合を確認するために、Biotinylated-MVPはHEK293F細胞で一時的に発現しました。非トランスフェクト細胞のエキソソームと比較して、トランスフェクト細胞のエキソソームから溶出したMVPからより高いレベルのESRNAが回収されました。私たちのデータは、これらのRBPがRNAリボヌクレタンパク質複合体の形でRNA分子とともにエキソソームに終わる可能性があることを示しています。これは、RNAのエキソソームへの輸送とエキソソーム内のRNAの維持に重要である可能性があります。このタイプのメンテナンスは、安定した複合体の形でのエキソソームからレシピエント細胞へのRNAのシャトルを支持する可能性があります。

The RNA that is packaged into exosomes is termed as exosomal-shuttle RNA (esRNA); however, the players, which take this subset of RNA (esRNA) into exosomes, remain largely unknown. We hypothesized that RNA binding proteins (RBPs) could serve as key players in this mechanism, by making complexes with RNAs and transporting them into exosomes during the biosynthesis of exosomes. Here, we demonstrate the presence of 30 RBPs in exosomes that were shown to form RNA-RBP complexes with both cellular RNA and exosomal-RNA species. To assess the involvement of these RBPs in RNA-transfer into exosomes, the gene transcripts encoding six of the proteins identified in exosomes (HSP90AB1, XPO5, hnRNPH1, hnRNPM, hnRNPA2B1, and MVP) were silenced by siRNA and subsequent effect on esRNA was assessed. A significant reduction of total esRNA was observed by post-transcriptional silencing of MVP, compared to other RBPs. Furthermore, to confirm the binding of MVP with esRNA, a biotinylated-MVP was transiently expressed in HEK293F cells. Higher levels of esRNA were recovered from MVP that was eluted from exosomes of transfected cells, as compared to those of non-transfected cells. Our data indicate that these RBPs could end up in exosomes together with RNA molecules in the form of RNA-ribonucleoprotein complexes, which could be important for the transport of RNAs into exosomes and the maintenance of RNAs inside exosomes. This type of maintenance may favor the shuttling of RNAs from exosomes to recipient cells in the form of stable complexes.