毛細血管ウエスタンブロット技術を使用したヒト脂肪組織タンパク質分析

毛細血管ウエスタンブロット（WES®）テクノロジーは最近、細胞培養溶解物タンパク質の分析のために検証されましたが、ヒト組織タンパク質に対して信頼できるかどうかは不明です。従来のウエスタンブロッティングをWES®キャピラリーウエスタン法と比較して、ヒト脂肪組織CD36の相対量、リン酸化ERK1/2（PERK1/2）の比率をインスリンクランプ中またはニアシン処理後の総ERK1/2とPAKTS473（AKTリン酸塩の摂食時のAKTリン酸塩の比較）と比較しました。これら2つの方法の結果は高度に相関していました（CD36でr = 0.932、Perk1/2：ERK1/2ではr = 0.905、PAKT/AKTの変化の場合はr = 0.923、p <0.001）。WES®では、これらのタンパク質の予想される分子量の周りの明確なピークを観察しました。WES®と従来のウエスタンブロットには、CD36、ERK1/2、およびAktの線形動的範囲がありました。PAKT/AKTの信号応答性の違いにより、適切な比較を可能にするために、データのキャリブレーターサンプルとログ変換を採用しました。WES®アプローチでは、従来のウエスタンブロットよりも少ないサンプルが必要であり、高感度と良好な再現性を達成しながら、技術者/アッセイ時間が少なくなりました。Capillary Western Technology（WES®）は、ヒト脂肪組織タンパク質の分析に満足のいく代替品を提供します。

A capillary western blot (Wes®) technology has recently been validated for analyses of cell culture lysate proteins, but whether it is reliable for human tissue proteins is unknown. We compared traditional western blotting to the Wes® capillary western method to quantitate the relative amount of human adipose tissue CD36, the ratio of phosphorylated Erk1/2 (pErk1/2) to total Erk1/2 during insulin clamp or after niacin treatment and the fold increase in pAktS473 (Akt phosphorylation on Ser473) in response to feeding. The results from these two methods were highly correlated (r = 0.932 for CD36, r = 0.905 for pErk1/2:Erk1/2, r = 0.923 for the change in pAkt/Akt, P < 0.001). On Wes® we observed the distinct peaks around the expected molecular weights for these proteins with decreasing peak areas with serial dilutions of loading protein amount. Wes® and traditional western blot both had linear dynamic ranges for CD36, Erk1/2 and Akt. Due to differences in signal responsiveness for pAkt/Akt, we employed a calibrator sample and log transformation of data to allow proper comparisons. The Wes® approach required less sample than the traditional western blot and less technician/assay time, while achieving high sensitivity and good reproducibility. Capillary western technology (Wes®) provides a satisfactory alternative for analyses of human adipose tissue proteins.