超パフォーマンス液体クロマトグラフィマス分光測定を使用したヒト血漿中のウルソール酸とオレアン酸の迅速かつ敏感な定量化

大気圧化学イオン化質量分析を妨害したウルトラパフォーマンス液体クロマトグラフィー（UPLC）を使用して、ヒト血漿中のウルソール酸（UA）およびオレアノール酸（OA）を分離および定量化しました。UAとOAは、サポートされた液体抽出を使用して0.5 mLのヒト血漿から抽出され、補助UPLC HSSカラムを使用して分離しました。この方法は、0.5 ng/mLの検出限界でUAとOAの両方の定量について検証されています。UPLCの分離は、0.4 mL/minの流量での移動相として、メタノールおよび5 mM酢酸アンモニウム（85:15）を使用したアイソクラティックな溶出で実行されます。アッセイは、両方の分析物に対して1 ng/mlから100 ng/mlから線形でした。総分析時間は7分で、保持時間は3.25（内部標準）、3.65（UA）、3.85分（OA）でした。血漿からの薬物の回収は70％から115％の範囲でした。3、30、および80 ng/ml（n = 14）の品質管理サンプルの分析では、それぞれ9.9％、4.3％、5.5％の1日内の変動係数がありました。リンゴの皮を消費したヒト患者の概念実証研究は、この分析方法がヒト被験者のUAおよび/またはOAの臨床研究に適用できることを示しています。

Ultra-performance liquid chromatography (UPLC) interfaced with atmospheric pressure chemical ionization mass-spectrometry was used to separate and quantify ursolic acid (UA) and oleanolic acid (OA) in human plasma. UA and OA were extracted from 0.5 mL human plasma using supported liquid extraction and separated utilizing an Acquity UPLC HSS column. The method has been validated for both UA and OA quantitation with a limit of detection of 0.5 ng/mL. The UPLC separations are carried out with isocratic elution with methanol and 5 mM ammonium acetate in water (85:15) as a mobile phase at a flow rate of 0.4 mL/min. The assay was linear from 1 ng/mL to 100 ng/mL for both analytes. The total analysis time was 7 min with the retention times of 3.25 (internal standard), 3.65 (UA) and 3.85 min (OA). Recovery of drug from plasma ranged from 70% to 115%. Analysis of quality control samples at 3, 30 and 80 ng/mL (n = 14) had an intra-day coefficient of variation of 9.9%, 4.3% and 5.5%, respectively. A proof-of-concept study in human patients who consumed apple peels indicates that this analytical method could be applied to clinical studies of UA and/or OA in human subjects.