N末端のin situタンパク質分解トロンビンとの彼のタグは、ヒトAldo-Keto Reductase 1C3結晶の回折品質を改善する

ヒトアルドケトレダクターゼ1C3（AKR1C3）はステロイドとプロスタグランジンを立体的に減少させ、生体異物の生体内変化に関与しています。さまざまな癌におけるその役割は、阻害剤の発生の潜在的な治療標的となっています。トロンビン切断可能なN末端His6タグを伴う組換えAKR1C3は、酵素阻害剤複合体の構造研究のためにPET-28（+）ベクターから発現しました。結晶化スクリーニング試験中にトロンビン切断によって彼のタグを特異的に除去するために、修正されたin situタンパク質分解アプローチが適用されました。これにより、結晶の形態と回折の品質が改善され、高解像度の回折データと構造溶液の獲得が可能になりました。このアプローチは、一般に、PET-28（+）ベクターを使用して発現する他のタンパク質に適用される場合があります。

Human aldo-keto reductase 1C3 (AKR1C3) stereospecifically reduces steroids and prostaglandins and is involved in the biotransformation of xenobiotics. Its role in various cancers makes it a potential therapeutic target for the development of inhibitors. Recombinant AKR1C3 with a thrombin-cleavable N-terminal His6 tag was expressed from a pET-28(+) vector for structural studies of enzyme-inhibitor complexes. A modified in situ proteolysis approach was applied to specifically remove the His tag by thrombin cleavage during crystallization screening trials. This improved the morphology and diffraction quality of the crystals and allowed the acquisition of high-resolution diffraction data and structure solution. This approach may be generally applicable to other proteins expressed using the pET-28(+) vector.