「自己切断」T2Aペプチド接続詞の下流遺伝子から翻訳された膜標的タンパク質の障害

遺伝子送達システムにおける信頼できるバイシストロニックまたはマルチストリックベクターの要件は、バイオ/生物医学技術の最前線にあります。複数の異種タンパク質の効率的な共発現を提供する方法は、特にさまざまな種類の疾患を治療するための医学では、多くの用途にとって価値があります。この研究では、昆虫のasigna（T2a）のウイルスに由来する自己切断2aペプチドを使用して、ビシストロン発現ベクターを設計および構築しました。これは、2Aシーケンスの最も効率的な切断を示しました。T2Aベースのベクターの2つのバージョンは、それぞれ2Aリンカーの上流と下流の核を吸うタンパク質、N-ミリストイルタンパク質と核を吸うタンパク質をコードするDNA配列を切り替えることにより構築されました。我々の結果は、同様のレベルのmRNA発現が発見され、T2Aの切断効率の100％が観察されたことを示しました。それにもかかわらず、n-ミリストイル化タンパク質を2aシーケンスの下流に配置できないというクリアされた証拠も報告しました。タンパク質産物は、ミリストイル化プロセスの変化により原形質膜に移行できないため、T2Aベースのベクターの遺伝子位置は、N-ミリストイル化タンパク質の細胞内局在に意味があります。したがって、観察は2Aペプチドを使用するための予防策としてマークされました。2Aペプチドテクノロジーを採用するためにビシストロンまたはマルチストリックの発現を生成するには、ベクター設計を、各個々のタンパク質の翻訳後修飾について、導入遺伝子の位置、シグナル配列、および翻訳後修飾について慎重に考慮する必要があります。

The requirement for reliable bicistronic or multicistronic vectors in gene delivery systems is at the forefront of bio/biomedical technology. A method that provides an efficient co-expression of multiple heterologous proteins would be valuable for many applications, especially in medical science for treating various types of disease. In this study, we designed and constructed a bicistronic expression vector using a self-cleaving 2A peptide derived from a virus of the insect Thosea asigna (T2A). This exhibited the most efficient cleavage of the 2A sequence. Two versions of the T2A-based vector were constructed by switching the DNA sequences encoding the proteins of interest, the N-myristoylated protein and the nuclear-homing protein, upstream and downstream of the 2A linker, respectively. Our results showed that similar levels of mRNA expression were found and 100% of cleavage efficiency of T2A was observed. Nevertheless, we also reported the cleared evidence that the N-myristoylated protein cannot be placed downstream of the 2A sequence. Since the protein product fails to translocate to the plasma membrane due to altered myristoylation process, the gene position of the T2A-based vector is meaningful for the subcellular localization of the N-myristoylated protein. Therefore, the observation was marked as a precaution for using the 2A peptide. To adopt the 2A peptide technology for generating the bicistronic or multicistronic expression, the vector design should be carefully considered for the transgene position, signal sequences, and post-translational modifications of each individual protein.