O、O-ジエチル有機リン農薬および抗体認識の分子動力学シミュレーションに対する抗原結合断片の産生

農薬のイムノアッセイは、迅速で効率的で、敏感で、安価であるため、新たな分析方法です。この研究では、O、O-ジエチル有機リン農薬（DOP）の広範なセットに対する組換え抗原結合断片（FAB）が生成され、特徴付けられました。＆kappa;鎖およびFDフラグメントをPCRを介して増幅し、ベクターPCOMB3XSSに挿入し、ファゲミドPCOMB3XSSの可溶性FABは、大腸菌のトップ10F＆rsquo;のイソプロピル＆ベータ; -d-チオガラクトシドによって誘導されました。SDS-PAGE、ウエスタンブロッティング、および間接的な競争力のあるELISAの結果は、FABが親MABの良好な特性を維持していることを示しました。抗体認識をよりよく理解するために、FABの3次元（3D）モデルは相同モデリングを介して構築され、FABとDOPの間の相互作用が分子ドッキングとダイナミクスシミュレーションを介して研究されました。このモデルは、FABとDOPの相互作用方法を明確に説明し、ARG-L96とARG-H52が主に抗体結合の原因であることを示しました。この研究は、その特性を改善するために、FABのさらなる突然変異誘発の基礎を提供しました。

Immunoassay for pesticides is an emerging analytical method since it is rapid, efficient, sensitive, and inexpensive. In this study, a recombinant antigen-binding fragment (Fab) against a broad set of O,O-diethyl organophosphorus pesticides (DOPs) was produced and characterized. The κ chain and Fd fragment were amplified via PCR and inserted into the vector pComb3XSS and the soluble Fab on phagemid pComb3XSS was induced by isopropyl β-d-thiogalactoside in E. coli TOP 10F’. SDS-PAGE, Western blotting, and indirect competitive ELISA results indicated that Fab maintained the good characteristics of the parental mAb. To better understand antibody recognition, the three-dimensional (3D) model of Fab was built via homologous modeling and the interaction between Fab and DOPs was studied via molecular docking and dynamics simulations. The model clearly explained the interaction manner of Fab and DOPs, and showed that the Arg-L96 and Arg-H52 were mainly responsible for antibody binding. This work provided a foundation for further mutagenesis of Fab to improve its characteristics.