ポリエチレングリコール分子量は、共焦点レーザースキャン顕微鏡によるスフェロイドイメージングのClearT2光学クリアリング方法に影響を与えます

共焦点レーザースキャン顕微鏡（CLSM）などのいくつかの蛍光顕微鏡技術は、浸透深度が限られています。その結果、これらの方法を使用する3次元（3-D）細胞培養の視覚化とイメージングは​​、重要な課題になる可能性があります。したがって、3D組織のイメージングを改善するために、不透明なスフェロイドに透明性を与えるように光学クリアリング方法が最適化されています。ヨウ化プロピジウム（PI）染色されたスフェロイドのイメージングのためにCLEART2法で使用されるポリエチレングリコール（PEG）分子量（MW）の影響を調査しました。結果は、CLEART2クリアリング方法が、使用されたすべてのPEG MW（4000、8000、および10,000 Da）のPi蛍光強度の保存に貢献していることを実証しました。さらに、PEG 4000 DAを使用して実行されるCLEART2メソッドにより、PI信号浸透深度と断面深度が向上しました。全体として、PEG MWの最適化は、CLSMによる無傷のスフェロイドのイメージングを改善できます。さらに、この作業は、治療薬のハイスループットスクリーニングのための製薬業界による3D細胞培養モデルの適用を増やすことにも貢献する可能性があります。

Some fluorescence microscopy techniques, such as confocal laser scanning microscopy (CLSM), have a limited penetration depth. Consequently, the visualization and imaging of three-dimensional (3-D) cell cultures, such as spheroids, using these methods can be a significant challenge. Therefore, to improve the imaging of 3-D tissues, optical clearing methods have been optimized to render transparency to the opaque spheroids. The influence of the polyethylene glycol (PEG) molecular weight (MW) used in the ClearT2 method for the imaging of propidium iodide (PI)-stained spheroids was investigated. The results demonstrated that the ClearT2 clearing method contributes to spheroids transparency and to the preservation of PI fluorescence intensity for all the PEG MW used (4000, 8000, and 10,000 Da). Furthermore, the ClearT2 method performed using PEG 4000 Da allowed a better PI signal penetration depth and cross-section depth. Overall, the optimization of PEG MW can improve the imaging of intact spheroids by CLSM. Furthermore, this work may also contribute to increase the application of 3-D cell culture models by the pharmaceutical industry for the high-throughput screening of therapeutics.