遺伝子トランスフェクションと伝達の効率を高めるための改善された方法

レンチウイルスを使用したトランスフェクションとトランスデューションは、生物医学研究で注目を集めています。現在までに、最大のトランスフェクションとウイルス輸送効率に到達する方法は依然として困難です。ここでは、異なる細胞株および一次培養細胞におけるFugene 6、Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000を含む市販のトランスフェクション試薬を使用して、トランスフェクションとウイルス導入効率を比較しました。顕微鏡とUV活性化を使用せずに、リポフェクタミン3000を使用して、採取された細胞のエッペンドルフチューブでは、強化された緑色蛍光タンパク質（EGFP）が明確に見られました。共焦点顕微鏡を使用して、HEK293細胞、マウス一次皮質ニューロン、およびヒト臍静脈内皮細胞（HUVEC）でEGFPの強い発現が観察されました。ウエスタンブロットは、リポフェクタミン3000トランスフェクトHEK293細胞からの細胞溶解物を使用して、リポフェクタミン2000またはFugene 6試薬と比較して導入されたHUVECを使用して、最も強いEGFP発現を示しました。Lipofectamine 3000トランスフェクション試薬と組み合わせたCX43 shrNAレンチウイルスを使用して、HUVECSで約90％のCX43ノックダウン効果を達成できます。したがって、我々の結果は、リポフェクタミン3000トランスフェクション試薬を使用することにより、はるかに高いトランスフェクションとウイルス導入効率を達成できることを示唆しています。

Transfection and transduction using lentivirus has gained attention in biomedical research. To date, how to reach the maximum transfection and viral transduction efficiency is still challenging. Here we compared the transfection and viral transduction efficiency using commercially available transfection reagents including FuGENE 6, Lipofectamine 2000 and Lipofectamine 3000 in different cell lines and primary cultured cells. Enhanced green fluorescent protein (EGFP) was clearly seen in Eppendorf tubes from harvested cells using Lipofectamine 3000 without using a microscope and UV activation. Strong expression of EGFP was observed in HEK293 cells, mouse primary cortical neurons and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) using confocal microscopy. Western blot showed the strongest EGFP expression using cell lysates from Lipofectamine 3000 transfected HEK293 cells and transduced HUVECs compared with Lipofectamine 2000 or FuGENE 6 reagents. Using Cx43 shRNA lentivirus combined with Lipofectamine 3000 transfection reagent, we can achieve about 90% Cx43 knockdown efficacy in HUVECs. Therefore, our results suggest that a much higher transfection and viral transduction efficiency can be attained by using Lipofectamine 3000 transfection reagent.