ループを介した等温増幅アッセイによる資源制限された設定における慢性および潜在的なオカルトHBV患者におけるB型肝炎ウイルスDNAの検出

B型肝炎ウイルス（HBV）の伝播は、通常、慢性HBV（CHB）またはオカルトHBV感染（OBI）患者からの血液または血液製剤の輸血により発生します。血清学的検査に加えて、例えばHBSAGおよび抗HBC（合計）、HBVDNAの検出は、OBI患者の診断に必要です。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（QPCR）を含むさまざまな核酸試験（NAT）を使用して、HBV-DNAを検出します。NATは高価であり、リソース制限設定でそれらを導入する障壁である技術的な専門知識が必要です。この研究は、CHBでのHBV-DNAおよび資源制限設定での潜在的なOBI患者の検出のためのQPCRの代替としてのループ媒介等温増幅（LAMP）アッセイの使用を評価するために実施されました。いくつかの変更を伴う公開されたプロトコルに続いて、ヒートブロックを使用してアガロースゲルで検出するか、QPCRサーモサイクラーを使用することにより、HBV-DNAを検出するためにランプアッセイが開発されました。LAMPアッセイは、CHBおよび潜在的なOBI患者から収集された熱処理血清から調製された上清に適用されました。血清中のHBVウイルス量は、単一ステップのHBV-DNA定量化キットを使用してQPCRによって測定されました。テストされた200のサンプルのうち、QPCRは症例の25.5％でHBV-DNAを検出することができましたが、LAMPアッセイは43.5％の症例でHBV-DNAを検出しました。QPCRは11（9.16％）の潜在的なOBI症例を検出することができましたが、LAMPアッセイは43（35.83％）の症例でHBV-DNAを特定しました。HBSAGおよび/または抗HBC（合計）のテストに加えて、LAMPアッセイによるHBV-DNAの検出は、リソース制限設定での輸送後HBV感染の防止に役立つ場合があります。

Transmission of Hepatitis B Virus (HBV) usually occurs due to the transfusion of blood or blood products from chronic HBV (CHB) or occult HBV-infected (OBI) patients. Besides serological tests, e.g. HBsAg and anti- HBc (total), detection of HBVDNA is necessary for the diagnosis of OBI patients. Different nucleic acid tests (NATs) including real- time-Polymerase Chain Reaction (qPCR) are used to detect HBV- DNA. The NATs are expensive and require technical expertise which are barriers to introduce them in resource-limited settings. This study was undertaken to evaluate the use of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) assay as an alternative to qPCR for the detection of HBV-DNA in CHB and potential OBI patients in resource-limited settings. Following the published protocols with some modifications, a LAMP assay was developed for detection of HBV-DNA by either using a heat block followed by detection in an agarose gel or using a qPCR thermocycler. The LAMP assay was applied to supernatant prepared from heat-treated serum collected from CHB and potential OBI patients. HBV viral load in serum was measured by qPCR using a single-step HBV-DNA quantification kit. Among 200 samples tested, qPCR was capable to detect HBV-DNA in 25.5% of cases, whereas LAMP assay detected HBV-DNA in 43.5% cases. The qPCR was able to detect 11 (9.16%) potential OBI cases, whereas LAMP assay identified HBV-DNA in 43 (35.83%) cases. In addition to tests for HBsAg and/or anti-HBc (total), detection of HBV-DNA by LAMP assay may aid in preventing post-transfusion HBV infection in resource-limited settings.