[多遺伝子組換えプラスミドPEG-FP-N1-HBSAG-ROP2の構造と発現]

目的：PEGFP-N1-HBSAG-2組換え発現プラスミドを構築し、HEK293T細胞をトランスフェクトし、トキソプラズマgondii核酸ワクチン発達の方法を支払う。 方法：HBSAG遺伝子配列とPCDNA3-P30-ROP2組換えプラスミド制限部位によれば、HBSAG遺伝子はPCRによって増幅されました。HBSAG遺伝子は、p30遺伝子の代わりにpcDNA3-p30-rop2にクローニングされました。HBSAG-ROP2フラグメントをPCRによって増幅し、後角ⅲおよびKPNⅰで消化してPEGFP-N1真核生物発現ベクターにクローンし、組換えPEGFP-N1-HBSAG-ROP2を構築しました。発現ベクターは、PCR増幅、制限エンドヌクレアーゼ、シーケンスの同定に基づいてHEK293T細胞にトランスフェクトされました。 結果：HBSAGのPCR積は約700 bpで、理論的価値と一致していました。約5.4 kbと1.9 kbの2つの帯域が、pcDNA3HBSAG-2組換えプラスミドを使用した二重酵素消化後に得られました。組換えプラスミドPEGFP-N1-HBSAG-ROP2は、約4.7 kbの空のベクトルフラグメントと約1.9 kbのHBSAG-ROP2フラグメントのバンドを生成するために二重に消化されました。シーケンスの結果は、シーケンスがGenBankの公開されたシーケンスと99.84％同一であることを示しました。標的プラスミドをHEK293T細胞に正常にトランスフェクトし、発現は正しかったため、タンパク質濃度は3.08 mg/mLでした。 結論：組換えプラスミドPEGFP-N1-HBSAG-ROP2が正常に構築され、効率的に発現されます。

OBJECTIVE: To construct pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 recombinant expression plasmid and transfect HEK293T cells for expression, and pay a way for Toxoplasma gondii nucleic acid vaccine development. METHODS: According to the HBsAg gene sequence and pcDNA3-p30-ROP2 recombinant plasmid restriction sites, the HBsAg gene was amplified by PCR. The HBsAg gene was cloned into the pcDNA3-p30-ROP2 and instead of p30 gene. The HBsAg-ROP2 fragment was amplified by PCR and digested with Hind Ⅲ and Kpn Ⅰ to clone into the pEGFP-N1 eukaryotic expression vector and construct the recombinant pEGFP-N1-HBsAg-ROP2. The expression vector was transfected into HEK293T cells based on the identification of PCR amplification, restriction endonucleases and sequencing. RESULTS: The PCR product of HBsAg was about 700 bp, which was consistent with the theoretical value. Two bands of about 5.4 kb and 1.9 kb were obtained after double enzyme digestion with pcDNA3HBsAg-ROP2 recombinant plasmid. The recombinant plasmid pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 was double-digested to generate an empty vector fragment of about 4.7 kb and a band of about 1.9 kb of HBsAg-ROP2 fragment. The results of sequencing showed that the sequence was 99.84% identical with the published sequence in GenBank. The target plasmid was successfully transfected into HEK293T cells, and the expression was correct, the protein concentration was 3.08 mg/ml. CONCLUSIONS: The recombinant plasmid pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 is successfully constructed and expressed efficiently.