ラット肝臓ミトコンドリアにおける1,1,1-トリフルオロ-3-テノイル酢酸によるジヒドロオロテート酸化とスーパーオキシド産生の完全阻害

1,1,1-トリフルオロ-3-テノイル酢酸は、オロテート酸塩形成と2,6-ジクロロフェノール - インドフェノールまたはシトホロームC c Ctochrorome C c ctの速度によって測定されたラット肝臓ミトコンドリアのジヒドロオロオルチェン酸酸化の完全な阻害を引き起こすことが示されました。。トリフルオロテノイルアセトンによる阻害は用量依存性であり、1 mMの濃度は完全に完全に阻害されたジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ活性を阻害しました。もう1つの鉄を追い出す剤である1,10-フェナントロリンも、肝臓酵素の全阻害を引き起こしました。鉄キレート剤は、肝臓ミトコンドリアのジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ活性の100％を阻害しましたが、脳酵素の場合、最大72％のみを阻害しました。トリフルオロテノイル酢酸による阻害は、メト硫酸フェナジンまたはユビキノンの添加により予防されませんでした。ジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ媒介スーパーオキシド生成は、酵素がトリフルオロテノイルアセトンによって完全に阻害された場合、または電子輸送システムが抗マイシンAによってブロックされたときに廃止されました。一次酵素から電子輸送鎖への同等物を減らすことの触媒活性と移動の重要性。さらに、この研究は、ジヒドロオロテートのジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ触媒酸化中のスーパーオキシドラジカルの産生が、電子輸送鎖のシトクロムB-C1セグメントにある可能性があることを示しています（Ubisemiquinoneの自動療法の結果として）一次酵素の部位。

1,1,1-Trifluoro-3-thenoylacetone was shown to cause complete inhibition of dihydroorotate oxidation in rat liver mitochondria as measured by orotate formation and the rate of dihydro-orotate-dependent reduction of 2,6-dichlorophenol-indophenol or cytochrome c. The inhibition by trifluorothenoylacetone was dose-dependent, and a concentration of 1 mM completely inhibited dihydro-orotate dehydrogenase activity. 1,10-Phenanthroline, another iron-chelating agent, also caused total inhibition of the liver enzyme. Whereas the iron chelators inhibited 100% of dihydro-orotate dehydrogenase activity in liver mitochondria, they inhibited only a maximum of 72% in the case of the brain enzyme. The inhibition by trifluorothenoylacetone was not prevented by addition of phenazine methosulphate or ubiquinone. Dihydro-orotate dehydrogenase-mediated generation of superoxide was abolished when the enzyme was fully inhibited by trifluorothenoylacetone or when the electron-transport system was blocked by antimycin A. These results suggest that the iron component(s) of dihydro-orotate dehydrogenase is of strategic importance for catalytic activity and transfer of reducing equivalents from the primary enzyme to the electron-transport chain. Furthermore, the study indicates that production of superoxide radicals during dihydro-orotate dehydrogenase-catalysed oxidation of dihydro-orotate may be at the cytochrome b-c1 segment of the electron-transport chain (as a consequence of autooxidation of ubisemiquinone) rather than at a site on the primary enzyme.