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背景：T細胞免疫グロブリン、ムチン（TIM）-3は、TIMファミリーに属するI型I膜貫通糖タンパク質です。この受容体は、ガレクチン-9（GAL9）に結合するTヘルパータイプ1（TH1）細胞で発現します。阻害信号を誘導します。その結果、Th1細胞のアポトーシスが発生し、CD8 T細胞の細胞毒性がin vitroで明らかになります。したがって、この免疫調節分子は、臨床目的の新しい標的として使用される場合があります。TIM-3発現細胞株に対するラクダポリクローナル抗体の産生がこの研究の目的でした。目的：この研究では、ヒトTIM-3を発現するHEK 293細胞を使用して、予防接種によりTIM-3に対するラクダポリクローナル抗体を得ることを目指しました。材料と方法：事前に合成されたヒトTIM-3CDNAをpcDNA3.1プラスミドに挿入し、新しいコンストラクトをHEK細胞にトランスフェクトしました。TIM-3発現は、QRT-PCRおよびフローサイトメトリーによって確認されました。ラクダ（6ヶ月）は、RTIM-3から調製されたHEK細胞を4回発現する溶解物で免疫しました。抗TIM-3抗体レベルは、ELISA法を使用して評価されました。結果：TIM-3は、88％の成功率でHEK細胞で正常にクローニングされました。最終注射後、組換え細胞溶解物で免疫化されたラクダの血清で、高レベルの抗TIM-3抗体が検出されました。結論：RHTIM-3セルディスプレイシステムは、将来の診断または治療アプローチに役立ちます。
背景：T細胞免疫グロブリン、ムチン（TIM）-3は、TIMファミリーに属するI型I膜貫通糖タンパク質です。この受容体は、ガレクチン-9（GAL9）に結合するTヘルパータイプ1（TH1）細胞で発現します。阻害信号を誘導します。その結果、Th1細胞のアポトーシスが発生し、CD8 T細胞の細胞毒性がin vitroで明らかになります。したがって、この免疫調節分子は、臨床目的の新しい標的として使用される場合があります。TIM-3発現細胞株に対するラクダポリクローナル抗体の産生がこの研究の目的でした。目的：この研究では、ヒトTIM-3を発現するHEK 293細胞を使用して、予防接種によりTIM-3に対するラクダポリクローナル抗体を得ることを目指しました。材料と方法：事前に合成されたヒトTIM-3CDNAをpcDNA3.1プラスミドに挿入し、新しいコンストラクトをHEK細胞にトランスフェクトしました。TIM-3発現は、QRT-PCRおよびフローサイトメトリーによって確認されました。ラクダ（6ヶ月）は、RTIM-3から調製されたHEK細胞を4回発現する溶解物で免疫しました。抗TIM-3抗体レベルは、ELISA法を使用して評価されました。結果：TIM-3は、88％の成功率でHEK細胞で正常にクローニングされました。最終注射後、組換え細胞溶解物で免疫化されたラクダの血清で、高レベルの抗TIM-3抗体が検出されました。結論：RHTIM-3セルディスプレイシステムは、将来の診断または治療アプローチに役立ちます。
Background: T cell Immunoglobulin, Mucin (TIM)-3, is a type I transmembrane glycoprotein belonging to TIM family. This receptor expresses on T helper type 1 (Th1) cells that binds to galectin-9 (Gal9); inducing an inhibitory signal. As a result, apoptosis of Th1 cells occurs and cytotoxicity of CD8 T cells becomes evident in vitro. Therefore, this immunomodulatory molecule may be used as a novel target for clinical purposes. The production of camel polyclonal antibodies against TIM-3-expressing cell line was the purpose of this study. Objectives: In this study, we aimed to use HEK 293 cells expressing human TIM-3 to obtain camel polyclonal antibody against TIM-3 by immunization. Materials and Methods: A pre-synthesized human TIM-3cDNA was inserted into pcDNA3.1 plasmid and the new construct was transfected in HEK cell. TIM-3 expression was confirmed by qRT-PCR and flow cytometry. A camel (6 months old) was immunized with the lysate prepared from rTIM-3 expressing HEK cells 4 times. The anti-TIM-3 antibody level was evaluated using ELISA method. Results: TIM-3 was successfully cloned in HEK cells with 88% success rate. High level of anti-TIM-3 antibody was detected in the serum of the camel immunized with the recombinant cell lysate, after final injection. Conclusions: Our rhTIM-3 cell display system can be useful for future diagnostic or therapeutic approaches.
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