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Gene19850101Vol.33issue(1)

改善されたM13ファージクローニングベクトルと宿主株:M13MP18およびPUC19ベクターのヌクレオチド配列

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, U.S. Gov't, Non-P.H.S.
  • Research Support, U.S. Gov't, P.H.S.
概要
Abstract

M13ベースのクローニングシステムに3種類の改善が導入されました。(1)大腸菌の宿主株は、大腸菌の細菌M13および高コピーPUCプラスミドクローニングベクターのために構築されています。これらの株に導入された突然変異は、修飾されていないDNAおよび反復配列のクローニングを改善します。新しいサプレッサーのないひずみは、選択された組換え体のクローニングを促進します。(2)M13MPおよびPUCベクターの完全なヌクレオチド配列は、選択したセグメントのシーケンスを含む多くのソースからまとめられています。M13MP18シーケンスは、M13MP18の位置6 125 bp(M13)または6967 bpの遺伝子IIにG対T置換を含めるように改訂されます。(3)シーケンスに適したM13クローンは、エキソヌクレアーゼHIおよびVIIを使用してポリクロニングサイトから一方向の進行性削除を生成する新しい方法によって得られました。

M13ベースのクローニングシステムに3種類の改善が導入されました。(1)大腸菌の宿主株は、大腸菌の細菌M13および高コピーPUCプラスミドクローニングベクターのために構築されています。これらの株に導入された突然変異は、修飾されていないDNAおよび反復配列のクローニングを改善します。新しいサプレッサーのないひずみは、選択された組換え体のクローニングを促進します。(2)M13MPおよびPUCベクターの完全なヌクレオチド配列は、選択したセグメントのシーケンスを含む多くのソースからまとめられています。M13MP18シーケンスは、M13MP18の位置6 125 bp(M13)または6967 bpの遺伝子IIにG対T置換を含めるように改訂されます。(3)シーケンスに適したM13クローンは、エキソヌクレアーゼHIおよびVIIを使用してポリクロニングサイトから一方向の進行性削除を生成する新しい方法によって得られました。

Three kinds of improvements have been introduced into the M13-based cloning systems. (1) New Escherichia coli host strains have been constructed for the E. coli bacteriophage M13 and the high-copy-number pUC-plasmid cloning vectors. Mutations introduced into these strains improve cloning of unmodified DNA and of repetitive sequences. A new suppressorless strain facilitates the cloning of selected recombinants. (2) The complete nucleotide sequences of the M13mp and pUC vectors have been compiled from a number of sources, including the sequencing of selected segments. The M13mp18 sequence is revised to include the G-to-T substitution in its gene II at position 6 125 bp (in M13) or 6967 bp in M13mp18. (3) M13 clones suitable for sequencing have been obtained by a new method of generating unidirectional progressive deletions from the polycloning site using exonucleases HI and VII.

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