A431細胞の表皮成長因子受容体モノクローナル抗受容体抗体の特性表皮成長因子作用の非競合性アゴニスト

免疫化されたBALB/Cマウス脾臓細胞とSP2/0-AG14骨髄腫細胞を融合した後、2D1-IGMであるA431細胞の表皮成長因子（EGF）受容体に対するモノクローナル抗体に対するモノクローナル抗体が生成されました。EGFのA431細胞表面受容体への2D1-IGMの特異的結合は、間接免疫蛍光、免疫沈降、および免疫ブロット分析によって実証されました。A431細胞への125-EGF結合のスキャチャード分析により、2D1-IGM処理はEGF受容体の数を変えないが、親和性の均一なアフィニティの集団からのEGF受容体の親和性の親和性の増加を引き起こしたことが示されました。EGFと同様に、2D1-IGMはEGF受容体のリン酸化とEGF受容体クラスタリングを誘発しました。EGFの場合のように、A431細胞では、低濃度の2D1-IGMでの低濃度でのDNA合成の刺激と阻害を伴う二相性成長応答が明らかでした。2D1-IGMの固有の「EGF様」生物活性は、EGFの存在によって強化されました。これらの結果は、EGFバインドが効果的なEGF様生物学的反応を開始するものとは異なる部位でのEGF受容体への2D1-IGMの結合がEGF受容体に結合することを示唆しています。また、2D1-IGMのEGF様生物学的効果は、細胞成長の制御に関与する可能性のある高親和性EGF受容体の集団によって媒介される可能性があります。

A monoclonal antibody to the epidermal growth factor (EGF) receptor of A431 cells, denoted 2D1-IgM, was generated after fusion of immunized BALB/c mouse spleen cells with SP2/0-Ag14 myeloma cells. Specific binding of 2D1-IgM to the A431 cell-surface receptor for EGF was demonstrated by indirect immunofluorescence, immunoprecipitation, and immunoblot analysis. Scatchard analysis of 125I-EGF binding to A431 cells demonstrated that 2D1-IgM treatment did not change the number of EGF receptors, but caused an increase in the affinity of EGF receptors from a population of low affinity to a uniform population of high affinity. Like EGF, 2D1-IgM induced phosphorylation of EGF receptors and EGF receptor clustering. As in the case of EGF, a biphasic growth response with stimulation of DNA synthesis at low and inhibition at high concentrations of 2D1-IgM was evident in A431 cells. The intrinsic "EGF-like" bioactivity of 2D1-IgM was enhanced by the presence of EGF. These results suggest that the binding of 2D1-IgM to the EGF receptor at a different site from that to which EGF binds can initiate an effective EGF-like biological response; and the EGF-like biological effects of 2D1-IgM may be mediated by a population of high affinity EGF receptors which may be involved in the control of cellular growth.