真核生物I型トポイソメラーゼは核小体で濃縮され、リボソームDNAで触媒的に活性化されています

細胞内の真核生物DNAトポイソメラーゼIの分布は、4つのレベルで分析されています。（i）核マトリックスのレベルで。（ii）細胞全体の免疫蛍光による細胞学的レベルで。（iii）プロテインA/コロイドの金技術を使用した電子顕微鏡レベルで。（iv）Topoisomerase Iが触媒的に活性であるシーケンスをその場で識別するためのDNAのレベルで。トポイソメラーゼIは核内ではっきりと非ランダムに分布していますが、酵素のユニークな分布は核マトリックスとは関係ありません。データは、トポイソメラーゼIが細胞の核小体に大きく濃縮されているという結論を支持しています。さらに、核小体内の特定の領域はトポイソメラーゼの枯渇しています。トポイソメラーゼに共有結合した細胞DNA配列の分離と分析を可能にする技術が開発されました。リボソームDNA配列は、総DNAと比較して、染色体環境から直接分離されたトポイソメラーゼ/DNA複合体で少なくとも20倍濃縮されています。これは、トポイソメラーゼIがin vivoでリボソームDNAで触媒的に活性であるという最初の直接的な証拠です。

The distribution of eukaryotic DNA topoisomerase I in the cell has been analyzed at four levels: (i) at the level of the nuclear matrix; (ii) at the cytological level by immunofluorescence of whole cells; (iii) at the electron microscopic level using the protein A/colloidal gold technique; and (iv) at the level of DNA to identify in situ the sequence upon which topoisomerase I is catalytically active. Although topoisomerase I is clearly distributed non-randomly in the nucleus, the unique distribution of the enzyme is not related to the nuclear matrix. The data support the conclusion that topoisomerase I is heavily concentrated in the nucleolus of the cell; furthermore, particular regions within the nucleolus are depleted of topoisomerase. A technique has been developed which allows isolation and analysis of the cellular DNA sequences covalently attached to topoisomerase. Ribosomal DNA sequences are at least 20-fold enriched in topoisomerase/DNA complexes isolated directly from a chromosomal setting, relative to total DNA. This is the first direct evidence that topoisomerase I is catalytically active on ribosomal DNA in vivo.