ヒト好中球コラゲナーゼの分泌型

ヒト好中球のコラゲナーゼは、ホルボール脂肪酢酸で分泌されるように刺激される可能性のある細胞内顆粒内に見られます。好中球コラゲナーゼのこの細胞外分泌型の形態は、好中球コラゲナーゼを特異的に認識することが以前に示されたモノクローナル抗体を使用して、免疫親和性クロマトグラフィーによって分離されました。酵素はこのカラムに効率的に結合し、それぞれ75、57、および22 kDaの3つの主要な種としてNASCNで溶出しました。これらのタンパク質は、ゲルろ過による放射性標識と分離後、3つのタンパク質のそれぞれがモノクローナル抗体によって沈殿したため、免疫学的に密接に関連していた。また、75 kDaタンパク質と57 kDaタンパク質は、ポリアクリルアミドゲルからの溶出後、非変性条件下で走行した後、コラゲナーゼ活性を示しました。さらに、57 kDaタンパク質は、時間とともに22 kDaタンパク質に自己分解されました。57 kDa酵素に調製したポリクローナル抗体は、免疫ブロット技術を使用して75 kDaタンパク質と22 kDaタンパク質も認識しました。潜在的なコラゲナーゼを含む粗好中球上清を免疫ブロットした場合、75 kDa酵素と57 kDa酵素の両方が存在していました。私たちの免疫親和性は、精製の過程で活性化されますが、粗好中球上清の潜在的な酵素に似ています。脱顆粒化された白血球からの分泌されたコラゲナーゼの複数の形態は、炎症で見られるようなより密接に似ている可能性があります。

Collagenase in human neutrophils is found within intracellular granules which can be stimulated to be secreted with phorbol myristic acetate. This extracellular secreted form of neutrophil collagenase was isolated by immunoaffinity chromatography using a monoclonal antibody previously shown to specifically recognize neutrophil collagenase. The enzyme efficiently bound to this column and was eluted with NaSCN as three major species of 75, 57, and 22 kDa, respectively. These proteins were closely related immunologically since, after radiolabeling and separation by gel filtration, each of the three proteins was precipitated by the monoclonal antibody. Also, the 75- and 57-kDa proteins exhibited collagenase activity after elution from polyacrylamide gels run under nondenaturing conditions. Further, the 57-kDa protein autodegraded into a 22-kDa protein with time. Polyclonal antibody, prepared to the 57-kDa enzyme, also recognized the 75- and 22-kDa proteins using an immunoblot technique. When crude neutrophil supernatants containing latent collagenase were immunoblotted, both the 75- and the 57-kDa enzymes were present. Our immunoaffinity purified active enzymes, although activated during the course of purification, resemble the latent enzymes in crude neutrophil supernatants. The multiple forms of secreted collagenase from degranulated leukocytes may resemble more closely that seen in inflammation.