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Cellular reprogramming2018Aug01Vol.20issue(4)

レチノイン酸処理を伴うin vitroで胚性幹細胞由来生殖細胞様細胞における新しいマウス特異的生殖細胞遺伝子発現の評価

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文献タイプ:
  • Evaluation Study
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

胚性体(ESC)によるOCT4-GFP(OCT4の緑色蛍光タンパク質の発現)胚性幹細胞(ESC)の分化を誘導する研究を設計し、レチノイン酸(RA)を使用して生殖細胞(GC)に生成する培養系(GC)に誘導し、発現を評価しました。分化細胞における(FKBP6、MOV10L1、4930432K21RIK、およびTEX13)のレベル。4つのGC関連遺伝子、OCT4、MVH、SCP3、およびSTRA8の発現レベルは、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(Q-RT-PCR)によって決定されました。免疫染色およびフローサイトメトリーを追加のテストとして使用して、Q-RT-PCR所見を確認しました。減数症マーカーと特定の遺伝子の発現で有意な増加が発生しました。FKBP6(P = 0.00)、Mov10L1(P = 0.01)、およびTEX13(P = 0.00)は、コントロールと比較してRA(+RA)で処理されたESC(P = 0.00)ra)。OCT4の発現は、すべての研究グループで減少しました。+RAグループの4930432K21RIK、MVH、STRA8、およびSCP3の発現レベルは、-RAグループの発現よりも高かった。フローサイトメトリー分析により、 +RAグループのMVH陽性細胞の平均数は、ESC、-RAおよびEB7グループと比較して大きいことが示されました(P = 0.00)。多能性因子としてのOCT4のダウンレギュレーションおよび減数分裂マーカーの発現であるこの仮説は、ESCがRAによって区別され、GC様細胞としての最初の減数分裂の接合体/パキテンに導入されているという仮説が提起されています。

胚性体(ESC)によるOCT4-GFP(OCT4の緑色蛍光タンパク質の発現)胚性幹細胞(ESC)の分化を誘導する研究を設計し、レチノイン酸(RA)を使用して生殖細胞(GC)に生成する培養系(GC)に誘導し、発現を評価しました。分化細胞における(FKBP6、MOV10L1、4930432K21RIK、およびTEX13)のレベル。4つのGC関連遺伝子、OCT4、MVH、SCP3、およびSTRA8の発現レベルは、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(Q-RT-PCR)によって決定されました。免疫染色およびフローサイトメトリーを追加のテストとして使用して、Q-RT-PCR所見を確認しました。減数症マーカーと特定の遺伝子の発現で有意な増加が発生しました。FKBP6(P = 0.00)、Mov10L1(P = 0.01)、およびTEX13(P = 0.00)は、コントロールと比較してRA(+RA)で処理されたESC(P = 0.00)ra)。OCT4の発現は、すべての研究グループで減少しました。+RAグループの4930432K21RIK、MVH、STRA8、およびSCP3の発現レベルは、-RAグループの発現よりも高かった。フローサイトメトリー分析により、 +RAグループのMVH陽性細胞の平均数は、ESC、-RAおよびEB7グループと比較して大きいことが示されました(P = 0.00)。多能性因子としてのOCT4のダウンレギュレーションおよび減数分裂マーカーの発現であるこの仮説は、ESCがRAによって区別され、GC様細胞としての最初の減数分裂の接合体/パキテンに導入されているという仮説が提起されています。

We designed a study to induce differentiation of Oct4-GFP (expression of Green Fluorescent Protein of oct4) embryonic stem cells (ESCs) by embryoid body (EB) culture system into germ cells (GCs) using retinoic acid (RA) and evaluated the expression level of (Fkbp6, Mov10l1, 4930432K21Rik, and Tex13) in differentiated cells. The expression levels of four GC-related genes, Oct4, Mvh, Scp3, and Stra8, was determined by quantitative real-time polymerase chain reaction (q-RT-PCR). Immunostaining and flow cytometry were used as additional tests to confirm q-RT-PCR findings. A significant increase occurred in the expression of meiotic markers and specific genes, Fkbp6 (p = 0.00), Mov10l1 (p = 0.01), and Tex13 (p = 0.00) in ESCs treated with RA (+RA) compared with the controls (-RA). Oct4 expression was decreased in all studied groups. The expression levels of 4930432K21Rik, Mvh, Stra8, and Scp3 in the +RA group was higher than that of the -RA group. Flow cytometry analysis showed that mean number of Mvh-positive cells in the +RA group was greater as compared with ESCs, -RA and EB7 groups (p = 0.00). Downregulation of Oct4 as a pluripotency factor as well as the expression of meiosis markers, this hypothesis is raised that ESCs are differentiated by RA, and have been introduced into the zygote/pachytene of first meiosis as GC-like cells.

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