グルタルアルデヒド活性化アガロースサポート上の組換えタンパク質Aの配向共有結合固定化

タンパク質A親和性クロマトグラフィーの高いIgG結合能力は、抗体精製および自己抗体関連疾患治療におけるその応用に不可欠です。志向の固定化戦略を使用して、グルタルアルデヒド活性化アガロース上の組換えタンパク質A（RSPA）を共有結合させました。グルタルアルデヒド濃度、pH、および反応性時間を制御することにより、一次アミノ基ごとにグルタルアルデヒドの1つまたは2つの分子をアガロースサポートに固定しました。アクティブ化されたサポートの構造の違いが評価されました。さらに、Bドメインの3D表面構造をモデル化して、反応性グループと吸着グループの分布を調査しました。単量体グルタルアルデヒドアガロース（AGA@MG）と比較して、二量体グルタルアルデヒドアガロース（AGA@DG）は、固定化中にRSPAのより多くのアミノ酸グループに関与しているようです。AGA@DG@RSPAからの0.24Ng/mg IgGの漏れたRSPAは、AGA@MG@RSPAの0.36Ng/mg IgGのそれよりわずかに低かった。ただし、AGA@MGは、調製された吸着剤をより高いIgG結合能力に及ぼすRSPAの配向固定化により適しています。低イオン強度と高いイオン強度でAGA@mgにRSPAを固定した場合、Langmuirモデルの最大容量はそれぞれ56.2および59.2mg/gでした。AGA@MGは、RSPAの配向固定化に寄与したAGA@DGと比較して、より短いスペーサーアームを提供しました。

High IgG-binding capacity of protein A affinity chromatography is crucial to its application in the antibody purification and autoantibody-associated disease treatment. An oriented immobilization strategy was used to covalently conjugate the recombinant protein A (rSpA) on the glutaraldehyde activated agarose. By controlling the glutaraldehyde concentration, pH and reactivity time, one or two molecules of glutaraldehyde per primary amino group were anchored on agarose supports. The structure differences of activated supports were evaluated. Moreover, the 3D surface structure of B domain was modeled to explore the distribution of reactive and adsorptive groups. Compared with the monomeric glutaraldehyde agarose (Aga@MG), the dimeric glutaraldehyde agarose (Aga@DG) seems to be involved with more amino acid groups of rSpA during the immobilization. The leaked rSpA of 0.24 ng/mg IgG from Aga@DG@rSpA was slightly lower than that of 0.36 ng/mg IgG from Aga@MG@rSpA. However, Aga@MG is more suitable for oriented immobilization of rSpA which endows the prepared adsorbents to higher IgG-binding capacity. When rSpA was immobilized on Aga@MG at the low and high ionic strength, the maximum capacities from Langmuir model were 56.2 and 59.2 mg/g, respectively. The Aga@MG provided shorter spacer arm compared with the Aga@DG, which contributed to the oriented immobilization of rSpA.