教育ラボでのラクターゼ酵素活性の測定

酵素がどのように機能するかを理解し、これを実生活の例に関連付けることは、生物学的および生物医学的科学における幅広い学士号にとって重要です。このフォローしやすいプロトコルは、1年生の学部薬局の学生向けに開発され、酵素反応と酵素分析の分析手順のエントリーレベルの紹介を提供します。選択した酵素はラクターゼです。これは、ヒト疾患/医薬品の実践に関連する市販の酵素の例を表しているためです。ラクターゼは栄養補助食品錠剤から抽出され、ラクターゼ（オルソフェノール - ベータ-D-ガラクトピラノシド、ONPG）の人工基質の加水分解に基づく比色測定アッセイを使用して評価されます。ラクターゼによるONPGの加水分解切断後のオルソニトロフェノールの放出は、420 ​​nmでの吸光度の変化によって測定され、酵素反応に対する温度の効果は、氷上、室温、37°C​​で反応を実行することにより評価されます。さまざまな条件下で酵素活性を評価し、異なる試薬を使用することにより、このプロトコルを使用して、より高度な分析を実装できます。

Understanding how enzymes work, and relating this to real life examples, is critical to a wide range of undergraduate degrees in the biological and biomedical sciences. This easy to follow protocol was developed for first year undergraduate pharmacy students and provides an entry-level introduction to enzyme reactions and analytical procedures for enzyme analysis. The enzyme of choice is lactase, as this represents an example of a commercially available enzyme relevant to human disease/pharmaceutical practice. Lactase is extracted from dietary supplement tablets, and assessed using a colorimetric assay based upon hydrolysis of an artificial substrate for lactase (ortho-nitrophenol-beta-D-galactopyranoside, ONPG). Release of ortho-nitrophenol following the hydrolytic cleavage of ONPG by lactase is measured by a change in absorbance at 420 nm, and the effect of the temperature on the enzymatic reaction is evaluated by carrying out the reaction on ice, at room temperature and at 37 °C. More advanced analysis can be implemented using this protocol by assessing the enzyme activity under different conditions and using different reagents.