ヒト血漿中の内因性キヌレニンとトリプトファンの定量化のための検証済みサロゲート分析物LC-MS/MSアッセイ

AIM：インドルアミン2,3-ジオキシゲナーゼ（IDO）およびトリプトファン2,3-ジオキシゲナーゼ（TDO）は、キヌレニン経路を介したトリプトファン代謝の初期および速度制御ステップを触媒し、免疫応答の媒介に重要な役割を果たします。トリプトファンとキヌレニンの正確な測定は、IDO/TDOの活性を監視するために重要です。実験：サロゲート分析（[15N2] - トリプトファンおよび[13C6] - キヌレニン）を使用して、キャリブレーション標準と品質制御の調製に使用しました。代理分析物と本物のマトリックスのアプローチを使用した適切な目的の検証が実行されました。 結果：酸性沈殿はサンプル調製に使用され、有意なマトリックス効果なしで良好な回復をもたらしました。精度と精度の結果は、受け入れ基準の範囲内でした。このアッセイは、IDO阻害時のキヌレニンの一時的な枯渇を確認するために、臨床研究への適用が成功したことを示しました。 結論：ヒト血漿サンプル中のトリプトファンとキヌレニンを測定するための適切な目的のスタイルで、堅牢で具体的かつ単純なLC-MS/MSメソッドが開発および検証されました。

AIM: Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) and tryptophan 2,3-dioxygenase (TDO) catalyze the initial and rate-controlling step of tryptophan metabolism through the kynurenine pathway, which plays an important role in mediating immune response. Accurate measurement of tryptophan and kynurenine is critical for monitoring the activity of IDO/TDO. Experimental: Surrogate analytes ([15N2]-Tryptophan and [13C6]-Kynurenine) were used for preparation of calibration standard and quality control. A fit-for-purpose validation using an approach of surrogate analyte and authentic matrix was carried out. RESULTS: Acid precipitation was used in sample preparation, which yielded good recovery without significant matrix effect. Precision and accuracy results were well within the acceptance criteria. The assay demonstrated successful application to a clinical study to confirm a transient depletion of kynurenine upon IDO inhibition. CONCLUSION: A robust, specific and simple LC-MS/MS method was developed and validated with a fit-for-purpose style for measuring tryptophan and kynurenine in human plasma samples.