毒素遺伝子の特性評価と壊死性腸炎（NE）におけるNetBの定量分析（NE）産卵および非NE産生クロストリジウム鶏から分離

近年の飼料中の抗生物質成長プロモーターの除去により、クロストリジウム障害感染症である鶏の壊死性腸炎（NE）が再出現し、業界の重大な経済的損失に貢献しています。C. perfringensによって生成された毒素は、素因となる因子と組み合わせて、NEの発症と発達の原因です。最近、いくつかの証拠が、NEの病原性におけるプラスミドエンコード毒素の潜在的な役割、特に壊死性腸炎B様（NetB）毒素を示しています。ただし、臨床NE分離株におけるNetB、Beta2毒素（CPB2）、およびC. perfringensの大きな細胞毒素（TPEL）の関連は確立されていません。したがって、15のNEプロデューシングおよび15の非NEプロデュースC. perfringens分離株における毒素型とNetB、Cpb2、およびTPEL遺伝子の存在を特徴付けました。すべての分離株は毒素型Aとして特徴付けられ、ヒトの食中毒に関連するCPEについては陰性でした。NETBは、それぞれPCRおよびQPCRにより、NE生産分離株の6.7％と70％で検出されました。15の非産生分離株では、NetBは従来のPCRで検出されませんでしたが、QPCRによって分離株の60％で検出されました。NetBの存在とコピー数は、NEおよび非産生分離株の間で有意差はありませんでした（P> 0.05）。CPB2またはTPELの存在下では、NE-非NE産生分離株の間に差は観察されませんでした（P> 0.05）。これらの結果は、NetB、CPB2、およびTPELの存在、およびC. perfringensのNetBのコピー数が臨床NEと相関していないことを示唆しています。さらに、従来のPCRではなくQPCRを使用してNetBを検出することをお勧めします。

Necrotic enteritis (NE) in chickens, a Clostridium perfringens infection, has re-emerged due to the removal of antibiotic growth promoters in feeds in recent years, thus contributing to significant economic losses for the industry. Toxins produced by C. perfringens in conjunction with predisposing factors are responsible for the onset and development of NE. Recently, several lines of evidence indicated the potential role of plasmid-encoded toxins in the virulence of NE, particularly necrotic enteritis B-like (NetB) toxin. However, the association of NetB, beta2 toxin (CPB2), and C. perfringens large cytotoxin (TpeL) in clinical NE isolates are not well-established. Therefore, we characterized the toxinotype and the presence of netB, cpb2, and tpeL genes in 15 NE-producing and 15 non-NE-producing C. perfringens isolates using conventional PCR and quantified netB among those isolates by quantitative PCR (qPCR). All isolates were characterized as toxinotype A and were negative for cpe, which is associated with human food poisoning. The netB was detected in 6.7% and 70% of NE-producing isolates by PCR and qPCR, respectively. In 15 non-NE-producing isolates, netB was not detected by conventional PCR, but was detected in 60% of isolates by qPCR. The presence of and the copy number of netB were not significantly different between NE- and non-NE-producing isolates (p >0.05). No difference was observed between NE- and non-NE-producing isolates in the presence of cpb2 or tpeL (p >0.05). These results suggest that the presence of netB, cpb2, and tpeL, as well as the copy number of netB in C. perfringens is not correlated with clinical NE. In addition, we suggest that qPCR, but not conventional PCR, be used to detect netB.