アデノウイルスE2Aおよび初期のSIMIANウイルス40ポリアデニル化部位の下流の要素の必須シーケンスと機能的等価性の定義

高度に保存されているAATAAA配列に加えて、ポリアデニル酸の下流[ポリ（a）]切断部位の特定の配列が必要です。以前の実験では、E2Aポリ（a）部位の下流35ヌクレオチドが十分であるが、20のヌクレオチドはそうではなかったことが示されました。アデノウイルスE2Aポリ（a）サイトにおける双方向欠失変異体の構造とアッセイは、Poly（a）サイトの使用に影響を与える冗長な複数の配列要素が存在する可能性があることを示しています。ポリ（a）部位と下流の31ヌクレオチド間の配列は、効率的な切断には必須ではありませんでした。さらにすべてではなく、特定の構造で効率的な切断を廃止した下流（3 'から+31）。+20から+38の間で、シーケンスT（A/G）TTTTTが複製されました。シーケンスのコピーが存在すると機能が保持され、このシーケンスが重要な要素を表すことを示唆しています。また、機能する可能性のある+43より遠位の追加のシーケンスがある場合があります。Poly（a）サイトの共通の特徴を確立するために、初期のSimianウイルス40（SV40）ポリ（a）部位を必須シーケンスについて分析しました。切断部位の下流の18ヌクレオチドを保持したSV40ポリ（A）部位の欠失は完全に機能的である一方で、下流5ヌクレオチドを保持したものはそうではなかったため、切断に必要な配列を定義しました。SV40配列とE2Aの配列と比較しても、有意なホモロジーは明らかになりませんでした。それにもかかわらず、アデノウイルスE2Aポリ（A）部位からSV40 +5変異体への下流配列を添加することにより、初期SV40ポリ（A）部位で正常な切断とポリアデニル化を回復させることができます。効率的な切断のためにE2Aサイトで必要とされたのと同じシーケンスは、SV40 Poly（A）サイトへのアクティビティも回復しました。

In addition to the highly conserved AATAAA sequence, there is a requirement for specific sequences downstream of polyadenylic acid [poly(A)] cleavage sites to generate correct mRNA 3' termini. Previous experiments demonstrated that 35 nucleotides downstream of the E2A poly(A) site were sufficient but 20 nucleotides were not. The construction and assay of bidirectional deletion mutants in the adenovirus E2A poly(A) site indicates that there may be redundant multiple sequence elements that affect poly(A) site usage. Sequences between the poly(A) site and 31 nucleotides downstream were not essential for efficient cleavage. Further deletion downstream (3' to +31) abolished efficient cleavage in certain constructions but not all. Between +20 and +38 the sequence T(A/G)TTTTT was duplicated. Function was retained when one copy of the sequence was present, suggesting that this sequence represents an essential element. There may also be additional sequences distal to +43 that can function. To establish common features of poly(A) sites, we also analyzed the early simian virus 40 (SV40) poly(A) site for essential sequences. An SV40 poly(A) site deletion that retained 18 nucleotides downstream of the cleavage site was fully functional while one that retained 5 nucleotides downstream was not, thus defining sequences required for cleavage. Comparison of the SV40 sequences with those from E2A did not reveal significant homologies. Nevertheless, normal cleavage and polyadenylation could be restored at the early SV40 poly(A) site by the addition of downstream sequences from the adenovirus E2A poly(A) site to the SV40 +5 mutant. The same sequences that were required in the E2A site for efficient cleavage also restored activity to the SV40 poly(A) site.