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細胞ベースの置換方法の実装にもかかわらず、マウスの致死アッセイは、医療用のボツリヌス毒素（BONT）の活性を決定するために頻繁に使用されます。1つの説明は、切断されたボント基質を検出するためにネオエピトープ特異的抗体を使用したため、現在考案されたアッセイは毒素の特定の血清型のみを検出できることです。最近、細胞ベースの機能アッセイを開発しました。このアッセイでは、神経細胞小胞からの神経伝達物質と同時に解放されるレポーター酵素の放出を阻害することによりBONT活性が決定されます。理論的には、このアッセイは、Bont血清型の活性を検出するのに適している必要があります。この仮定と一致して、現在の研究は、分化したヒト神経芽細胞腫ベースのレポーター細胞株（SIMA-HPOMC1-26-Gluc細胞）からのルシフェラーゼの刺激依存性放出がBont-AおよびCによって阻害されたことを示しています。さらに、これはまた、Bont-Bおよび破傷風毒素によって阻害され、より低く、より高い濃度で阻害されました。実際のアプリケーションでのこの手法の適合性をサポートするために、Bont-Aの医薬品調製で得られた用量反応曲線は、マウスの致死アッセイで決定された活性を密接に反映しています。要約すると、新しく確立された細胞ベースのアッセイは、マウスの致死アッセイおよびその他の現在確立された細胞ベースのアッセイに代わる多用途で特定の代替品を表している可能性があります。
細胞ベースの置換方法の実装にもかかわらず、マウスの致死アッセイは、医療用のボツリヌス毒素（BONT）の活性を決定するために頻繁に使用されます。1つの説明は、切断されたボント基質を検出するためにネオエピトープ特異的抗体を使用したため、現在考案されたアッセイは毒素の特定の血清型のみを検出できることです。最近、細胞ベースの機能アッセイを開発しました。このアッセイでは、神経細胞小胞からの神経伝達物質と同時に解放されるレポーター酵素の放出を阻害することによりBONT活性が決定されます。理論的には、このアッセイは、Bont血清型の活性を検出するのに適している必要があります。この仮定と一致して、現在の研究は、分化したヒト神経芽細胞腫ベースのレポーター細胞株（SIMA-HPOMC1-26-Gluc細胞）からのルシフェラーゼの刺激依存性放出がBont-AおよびCによって阻害されたことを示しています。さらに、これはまた、Bont-Bおよび破傷風毒素によって阻害され、より低く、より高い濃度で阻害されました。実際のアプリケーションでのこの手法の適合性をサポートするために、Bont-Aの医薬品調製で得られた用量反応曲線は、マウスの致死アッセイで決定された活性を密接に反映しています。要約すると、新しく確立された細胞ベースのアッセイは、マウスの致死アッセイおよびその他の現在確立された細胞ベースのアッセイに代わる多用途で特定の代替品を表している可能性があります。
Despite the implementation of cell-based replacement methods, the mouse lethality assay is still frequently used to determine the activity of botulinum toxin (BoNT) for medical use. One explanation is that due to the use of neoepitope-specific antibodies to detect the cleaved BoNT substrate, the currently devised assays can detect only one specific serotype of the toxin. Recently, we developed a cell-based functional assay, in which BoNT activity is determined by inhibiting the release of a reporter enzyme that is liberated concomitantly with the neurotransmitter from neurosecretory vesicles. In theory, this assay should be suitable to detect the activity of any BoNT serotype. Consistent with this assumption, the current study shows that the stimulus-dependent release of a luciferase from a differentiated human neuroblastoma-based reporter cell line (SIMA-hPOMC1-26-GLuc cells) was inhibited by BoNT-A and-C. Furthermore, this was also inhibited by BoNT-B and tetanus toxin to a lesser extent and at higher concentrations. In order to provide support for the suitability of this technique in practical applications, a dose⁻response curve obtained with a pharmaceutical preparation of BoNT-A closely mirrored the activity determined in the mouse lethality assay. In summary, the newly established cell-based assay may represent a versatile and specific alternative to the mouse lethality assay and other currently established cell-based assays.
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