パパインによる消化による豚頸動脈からの平滑筋細胞の分離

豚頸動脈からの生存可能な細長い平滑筋細胞の調製のための新しい方法について説明します。細胞は、カルシウムを含まない溶液中の加圧動脈のパパイン消化によって調製されました。消化後、動脈を反転させ、カルシウムを含まない溶液中の培地の内膜表面から細かいストリップをからかい、単一の細胞を放出しました。生存率は、トリパンブルーの除外と位相制御顕微鏡下の外観によって評価されました。これらの基準により、隔離された細胞の約20％が実行可能でした。これらの細胞の最も際立った予期せぬ特徴は、その長さでした。弛緩した生存細胞の平均長は240.4 +/- 47.4ミクロン（SD、n = 76）であり、これは動脈平滑筋細胞について以前に報告されたよりもはるかに長い。カルシウム（1.6 mm）により、生存可能な細胞のほとんどがわずかに収縮し、カルシウムの平均細胞長は194.4 +/- 57.7ミクロンでした。1.6 mMの細胞は、10ミクロムヒスタミンまたはカルシウムイオノフォアA23187（10ミクロム）に反応して実質的に収縮し、ヒスタミン受容体と収縮装置が依然として機能していることを示しています。

A new method is described for the preparation of viable, elongated smooth muscle cells from the swine carotid artery. Cells were prepared by papain digestion of pressurized arteries in calcium-free solution. After digestion, the arteries were everted, and fine strips were teased from the intimal surface of the media in calcium-free solution, releasing single cells. Viability was assessed by exclusion of trypan blue and by appearance under phase-contrast microscopy. By these criteria, approximately 20% of the isolated cells were viable. The most distinguishing and unexpected characteristic of these cells was their length. Mean length of the relaxed viable cells was 240.4 +/- 47.4 microns (SD, n = 76), which is much longer than previously reported for arterial smooth muscle cells. Calcium (1.6 mM) caused most of the viable cells to contract slightly, and the mean cell length in calcium was 194.4 +/- 57.7 microns. Cells in 1.6 mM calcium contracted substantially in response to 10 microM histamine or the calcium ionophore A23187 (10 microM), demonstrating that histamine receptors and the contractile apparatus were still functional.