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センダイウイルスヘマグルチニン/ニューラミニダーゼ（HN）糖タンパク質を含む膜小胞は、ロードされたホスファチジルセリン（PS）からのカルボキシフルオレセイン（CF）の放出を誘導することができましたが、ホスファチジルコリン（PC）リポソームを搭載していません。同様に、蛍光脱毛は、自己消光n-（7-ニトロ-2,1,3-ベンゾキサジアゾール-4-イル）ホスファチジルエタノールアミン（N-NBD-PE）を持つHN小胞の場合にのみ観察されましたが、PSとはインキュベートされませんでした。リポソーム。したがって、センダイウイルスhn糖タンパク質小胞と負に帯電したPSリポソームとの間の融合が示唆されています。PSリポソームとプロナゼ処理されたHN小胞をインキュベートした場合、CF放出と蛍光脱式の誘導は観察されませんでした。一方、Hn小胞の融合活性は、ジチオトレイトール（DTT）またはフェニルメタンスルホニルフッ化物（PMSF）での処理によって阻害されませんでした。融合は、媒体のpHに大きく依存しており、pH 4.0で60〜90秒のインキュベーション後に最大でした。電子顕微鏡研究では、PSリポソームを伴うHN小胞のpH 4.0でのインキュベーションは、どちらも平均直径150 nmであり、平均直径が450 nmに達する大きな単層小胞の形成をもたらすことが示されました。リポソーム膜およびウイルス膜融合のメカニズムとこれらの観察結果の関連性について説明します。
センダイウイルスヘマグルチニン/ニューラミニダーゼ（HN）糖タンパク質を含む膜小胞は、ロードされたホスファチジルセリン（PS）からのカルボキシフルオレセイン（CF）の放出を誘導することができましたが、ホスファチジルコリン（PC）リポソームを搭載していません。同様に、蛍光脱毛は、自己消光n-（7-ニトロ-2,1,3-ベンゾキサジアゾール-4-イル）ホスファチジルエタノールアミン（N-NBD-PE）を持つHN小胞の場合にのみ観察されましたが、PSとはインキュベートされませんでした。リポソーム。したがって、センダイウイルスhn糖タンパク質小胞と負に帯電したPSリポソームとの間の融合が示唆されています。PSリポソームとプロナゼ処理されたHN小胞をインキュベートした場合、CF放出と蛍光脱式の誘導は観察されませんでした。一方、Hn小胞の融合活性は、ジチオトレイトール（DTT）またはフェニルメタンスルホニルフッ化物（PMSF）での処理によって阻害されませんでした。融合は、媒体のpHに大きく依存しており、pH 4.0で60〜90秒のインキュベーション後に最大でした。電子顕微鏡研究では、PSリポソームを伴うHN小胞のpH 4.0でのインキュベーションは、どちらも平均直径150 nmであり、平均直径が450 nmに達する大きな単層小胞の形成をもたらすことが示されました。リポソーム膜およびウイルス膜融合のメカニズムとこれらの観察結果の関連性について説明します。
Membrane vesicles containing the Sendai virus hemagglutinin/neuraminidase (HN) glycoprotein were able to induce carboxyfluorescein (CF) release from loaded phosphatidylserine (PS) but not loaded phosphatidylcholine (PC) liposomes. Similarly, fluorescence dequenching was observed only when HN vesicles, bearing self-quenched N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)phosphatidylethanolamine (N-NBD-PE), were incubated with PS but not PC liposomes. Thus, fusion between Sendai virus HN glycoprotein vesicles and the negatively charged PS liposomes is suggested. Induction of CF release and fluorescence dequenching were not observed when Pronase-treated HN vesicles were incubated with the PS liposomes. On the other hand, the fusogenic activity of the HN vesicles was not inhibited by treatment with dithiothreitol (DTT) or phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF), both of which are known to inhibit the Sendai virus fusogenic activity. Fusion was highly dependent on the pH of the medium, being maximal after an incubation of 60-90 s at pH 4.0. Electron microscopy studies showed that incubation at pH 4.0 of the HN vesicles with PS liposomes, both of which are of an average diameter of 150 nm, resulted in the formation of large unilamellar vesicles, the average diameter of which reached 450 nm. The relevance of these observations to the mechanism of liposome-membrane and virus-membrane fusion is discussed.
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