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本研究では、ウサギ卵母細胞の適切な副形成活性化（PA）手順を調査し、ウサギ胎児線維芽細胞（RFF）を使用した体細胞核移動（SCNT）胚の発達潜在性を調査しました。電気的活性化は、卵母細胞が3つの直接電流（DC）パルス（それぞれ40 V/mm、20μs）によって活性化されたときに、胚盤胞（14.06％）の最適な速度があり、続いて6-ジメチルアミノプリン（6-DMAP）とシクロヘキシミド（CHX）が続きました。処理;イオノマイシン（イオン）+6-DMAP+CHX（12.07％）の活性化の胚盤胞率は、イオン+6-DMAP（8.6％）の活性化またはイオン+CHX（1.24％）の活性化の胚盤よりも高かった。イオン+6-DMAP+CHXとDC+6-DMAP+CHXグループの間に胚盤胞率に有意な差はありませんでした。塩基性ウサギ培地（M-199）+10％胎児ウシ血清（FBS; 14.28％）のイオン+6-DMAP+CHX活性化卵母細胞の胚盤胞率は、バッファロー条件の培地（5.75％）またはそれよりも高かったG1/G2培地（0）、およびM-199+10％FBSにアミノ酸を補充した場合、胚盤胞率が増加しました。毎日または1日おきにさわやかな培地媒体は、胚盤胞率を大幅に増加させました。3〜5日間の0.5％FBSによるドナー細胞の治療は、血清浸透なし（22.47％）または6-9日間の0.5％FBS治療（23.61％）よりもSCNT胚（33.33％）の胚盤胞速度（33.33％）を増加させました。非トランスジェニックRFFに由来するSCNT胚の胚盤胞率は、エレクトロポレーションによりトランスジェニックRFFに由来するものよりも高かった。エレクトロポレーション（32.22％）によりRFFに由来するSCNT胚の胚盤胞の発達能力は、リポソーム（19.11％）またはリン酸カルシウム（20.00％）トランスフェクションの胚盤胞（32.22％）よりも高く、エレクトロポレーション基からの胚のみがEGFP発現（24.44％）を持っています。。結論として、この研究は、SCNTによるウサギ胚の収量の条件を初めて体系的に最適化しました。
本研究では、ウサギ卵母細胞の適切な副形成活性化（PA）手順を調査し、ウサギ胎児線維芽細胞（RFF）を使用した体細胞核移動（SCNT）胚の発達潜在性を調査しました。電気的活性化は、卵母細胞が3つの直接電流（DC）パルス（それぞれ40 V/mm、20μs）によって活性化されたときに、胚盤胞（14.06％）の最適な速度があり、続いて6-ジメチルアミノプリン（6-DMAP）とシクロヘキシミド（CHX）が続きました。処理;イオノマイシン（イオン）+6-DMAP+CHX（12.07％）の活性化の胚盤胞率は、イオン+6-DMAP（8.6％）の活性化またはイオン+CHX（1.24％）の活性化の胚盤よりも高かった。イオン+6-DMAP+CHXとDC+6-DMAP+CHXグループの間に胚盤胞率に有意な差はありませんでした。塩基性ウサギ培地（M-199）+10％胎児ウシ血清（FBS; 14.28％）のイオン+6-DMAP+CHX活性化卵母細胞の胚盤胞率は、バッファロー条件の培地（5.75％）またはそれよりも高かったG1/G2培地（0）、およびM-199+10％FBSにアミノ酸を補充した場合、胚盤胞率が増加しました。毎日または1日おきにさわやかな培地媒体は、胚盤胞率を大幅に増加させました。3〜5日間の0.5％FBSによるドナー細胞の治療は、血清浸透なし（22.47％）または6-9日間の0.5％FBS治療（23.61％）よりもSCNT胚（33.33％）の胚盤胞速度（33.33％）を増加させました。非トランスジェニックRFFに由来するSCNT胚の胚盤胞率は、エレクトロポレーションによりトランスジェニックRFFに由来するものよりも高かった。エレクトロポレーション（32.22％）によりRFFに由来するSCNT胚の胚盤胞の発達能力は、リポソーム（19.11％）またはリン酸カルシウム（20.00％）トランスフェクションの胚盤胞（32.22％）よりも高く、エレクトロポレーション基からの胚のみがEGFP発現（24.44％）を持っています。。結論として、この研究は、SCNTによるウサギ胚の収量の条件を初めて体系的に最適化しました。
The present study explored a suitable parthenogenetic activation (PA) procedure for rabbit oocytes and investigated the developmental potential of somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos using rabbit foetal fibroblasts (RFFs). The electrical activation had the optimal rate of blastocyst (14.06%) when oocytes were activated by three direct current (DC) pulses (40 V/mm, 20 μs each) followed by 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) and cycloheximide (CHX) treatment; the blastocyst rate of ionomycin (ION) + 6-DMAP + CHX (12.07%) activation was higher than that of ION + 6-DMAP (8.6%) activation or ION + CHX (1.24%) activation; there was no significant difference in blastocyst rate between ION + 6-DMAP + CHX and DC + 6-DMAP + CHX groups. The blastocyst rate of ION + 6-DMAP + CHX-activated oocytes in the basic rabbit culture medium (M-199) + 10% foetal bovine serum (FBS; 14.28%) was higher than that in buffalo conditioned medium (5.75%) or G1/G2 medium (0), and the blastocyst rate was increased when M-199 + 10% FBS was supplemented with amino acids. Refreshing culture medium every day or every other day significantly increased the blastocyst rate. Treatment of donor cells with 0.5% FBS for 3-5 days increased blastocyst rate of SCNT embryos (33.33%) than no serum starvation (22.47%) or 0.5% FBS treatment for 6-9 days (23.61%); the blastocyst rate of SCNT embryos derived from nontransgenic RFFs was higher than that derived from transgenic RFFs by electroporation. The blastocyst development ability of SCNT embryos derived from RFFs by electroporation (32.22%) was higher than that of liposome (19.11%) or calcium phosphate (20.00%) transfection, and only the embryos from electroporation group have the EGFP expression (24.44%). In conclusion, this study for the first time systematically optimized the conditions for yield of rabbit embryo by SCNT.
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