メタンモノオキシゲナーゼ：フラボタンパク質成分の精製と特性

フラビン：NADHオキシドレダクターゼ（フラボタンパク質）成分のメタンモノオキシゲナーゼの均一性への精製のために、嫌気性手術が開発されました。ゲルろ過によって決定されたフラボタンパク質の分子量は約40,000であり、沈降平衡分析により、約38,000でした。精製されたフラボタンパク質は、沈降定数（S20、W）値が約2.1 Sの単量体タンパク質です。フラボタンパク質の吸収スペクトルは、460 nmと395 nmの肩でピークに達します。フラボタンパク質の蛍光成分の蛍光励起と放出スペクトルは、それぞれ450、370、および530 nmでピークを持っていました。FADは、薄層クロマトグラフィーによってフラボタンパク質の補綴グループとして特定されました。フラボタンパク質には、タンパク質のモルあたり鉄と酸湿潤硫化物のそれぞれ約1モルと2分モルが含まれていました。フラボタンパク質は、嫌気性条件下でNADHによって直接減少しました。中性フラビンセミキノンの形成は、NADHによるフラボタンパク質の嫌気性滴定中に、またEPR分光法により2.004のG値でのフリーラジカルシグナルとして検出されました。鉄硫黄クラスターのG値は2.04、1.96、および1.87であり、Fe2S2中心の特徴であるG平均1.96を生成します。フラボタンパク質に対して調製された抗体は、フラボタンパク質と反応し、メタンモノオキシゲナーゼ活性を阻害しました。

An anaerobic procedure was developed for the purification of the flavin:NADH oxidoreductase (flavoprotein) component of methane monooxygenase to homogeneity. The molecular weight of the flavoprotein determined by gel filtration was about 40,000, and by sedimentation equilibrium analysis, about 38,000. The purified flavoprotein is a monomeric protein with a sedimentation constant (S20,W) value of about 2.1 S. The absorption spectrum of the flavoprotein has a peak at 460 nm and shoulder at 395 nm. The fluorescent excitation and emission spectra of the fluorescent component of flavoprotein had peaks at 450, 370, and 530 nm, respectively. A FAD was identified as a prosthetic group of flavoprotein by thin-layer chromatography. The flavoprotein contained about 1 mol of FAD and 2 mol each of iron and acid-labile sulfide per mole of protein. The flavoprotein was directly reduced by NADH under anaerobic conditions. The formation of neutral flavin semiquinone was detected during anaerobic titration of flavoprotein by NADH and also as a free radical signal at a g value of 2.004 by EPR spectroscopy. The iron sulfur cluster has g values of 2.04, 1.96, and 1.87, yielding a g average of 1.96, characteristic of a Fe2S2 center. Antibody prepared against the flavoprotein reacted with flavoprotein and inhibited methane monooxygenase activity.