内容による不連続なパーコール密度勾配によるヒト精子の浄化

ヒトの精子は、遠心管の内側の柱に配置された不連続なパーコール密度勾配を使用することにより、高度に精製されました。6 mlの80％パーコール溶液を、70、60、および40％のパーコールソリューションの連続した1.0 ml層を含む内側のカラムを含む遠心管に注ぎました。希釈した精液を勾配の上に置き、チューブをスイングアウトローターを使用して600 x gで30分間遠心分離しました。遠心分離後、進行性運動性精子の大部分は堆積物に分離されました。彼らは93 +/- 4.1％の平均運動性を持っていました（n = 10）。細菌を含む他の細胞成分は、内側の柱に残っています。精製された精子画分における細菌汚染のレベルは、定量化された種のほとんどで検出を下回っていました。精製された精子は、染料の排除によって判断されるように、92 +/- 3.2％以上の生存であることがわかり、異常な精子は5.2 +/- 1.4％に減少しました。内側のカラムの使用により、残留タンパク質、フルクトース、および酸ホスファターゼ活性によって推定されるように、精製精子では精液による汚染は無視できました。

Human sperm were highly purified through the use of a discontinuous Percoll density gradient placed in an inner column of a centrifuge tube. Six ml of 80% Percoll solution were poured into a centrifuge tube with an inner column containing successive 1.0-ml layers of 70, 60, and 40% Percoll solutions. Diluted semen was placed on top of the gradient, and the tube was centrifuged at 600 X g for 30 min using a swing-out rotor. After centrifugation, the majority of the progressive motile sperm were isolated in the sediment; they had a mean motility of 93 +/- 4.1% (n = 10). Other cellular components, including bacteria, remaining in the inner column. The level of bacterial contamination in the purified sperm fraction was below detection for most of the species quantified. The purified sperm were found to be more than 92 +/- 3.2% viable, as judged by dye exclusion, and abnormal sperm were reduced to 5.2 +/- 1.4%. Because of the use of the inner column, the contamination by seminal plasma was negligible in the purified sperm, as estimated by residual protein, fructose, and acid phosphatase activity.