亜鉛フィンガータンパク質ZNF191（243-368）の亜鉛フィンガー3の変異を伴うN末端Hisタグ付きタンパク質の発現、精製、および特性評価

Znf191の亜鉛フィンガー領域である亜鉛フィンガータンパクZnf191（243-368）は、肝細胞癌の細胞増殖と潜在的に関連しています。His-Tag発現システムを使用して、タンパク質特性、構造、機能の分析のために、Znf191（243-368）の亜鉛フィンガー3に変異を伴うタンパク質を発現および精製しました。His-Tag融合タンパク質の精製は、Znf191（243-368）包摂体の精製よりもシンプルで高速でした。His-Tag融合変異タンパク質の特性と構造は、分光技術とDNA加水分解実験を使用して調査されました。HIS6-TAGシステムは、ZNF191（243-368）を表現するために使用できます。Znf191（243-368）のN末端でのHis6-TAGの存在は、その特性と構造に明らかに影響しませんでした。しかし、亜鉛フィンガー3の部位指向変異は、タンパク質の構造に影響を与えました。HIS6-ZF-F3/H4のDNAヒドロラーゼ活性は、亜鉛フィンガー3の4つのヒスチジンが加水分解酵素の活性中心と同様の構造を形成する可能性があることを示唆しています。この研究は、連続ヒスチジンが特定の機能のために特定の構造を形成する必要があることを報告し、人工ヌクレアーゼの設計に関する新しい洞察を提供します。

Zinc finger protein ZNF191(243-368), the zinc finger region of ZNF191, is potentially associated with cell proliferation in hepatocellular carninoma. A His-tag expression system was used to express and purify proteins with mutations in the zinc finger 3 of ZNF191(243-368) for analysis of protein properties, structure, and functions. The purification of the His-tag fusion proteins was simpler and faster than that of the ZNF191(243-368) inclusion bodies. The properties and structures of the His-tag fusion mutant proteins were investigated using spectrographic techniques and DNA hydrolysis experiment. The His6-tag system could be used to express ZNF191(243-368). The presence of the His6-tag at the N-terminus of ZNF191(243-368) did not evidently affect its properties and structure. However, the site-directed mutations in zinc finger 3 affected the structure of the protein. The DNA hydrolase activity of His6-ZF-F3/H4 suggested that four histidines in zinc finger 3 might form a structure similar to that of the active center in a hydrolase. This work reports that continuous histidines need to form a certain structure for specific functions, and provides new insights into the design of an artificial nuclease.