Luminexプラットフォーム上で2つの異なる二次抗体で監視されている異なるビードセットで観察された腎疾患患者におけるHLA IgG抗体の課在内変動の重要性

移植候補における抗HLA同種抗体の正確な測定は、感作の程度を決定し、臓器配分のための容認できない抗原のリストに必要です。ビーズでコーティングされたHLA分子の構成と検出抗体の性質の両方が、ルミネックス単一抗原ビーズアッセイを使用して、抗HLA IgGの存在と強度の評価を妨げる可能性があります。末期腎疾患患者の血清抗体は、ポリクローナルFAB（イッグポリファブ）およびモノクローナル-GG（FCMONOIGG）の第2抗体で監視されたライフコード（LC）およびラボスクリーン（LS）ビーズセットを使用して比較しました。平均蛍光強度（MFI）> 500（血清希釈1/10）での陽性結果を使用して、パネル反応性抗体（CPRA）レベルを計算しました。LSビードセットは、ペプチドの有無にかかわらず無傷のHLA抗原に加えて単量体変異体でコーティングされていますが、LCビードセットには単量体変異体がなく、ペプチドを含まないヘテロダイマーが少ない。その結果、HLAの両方のクラスに対するIgG抗体は、LCビードセットよりもLSを使用してより多くの抗原に対して反応しました。両方のクラスで、MFIもLCよりもLSの方が頻繁に高かった。HLA-Iの場合、MFIはfcmonoiggよりもIghpolyfabよりも高かった。HLA-IIの場合、逆が発生し、ビーズセットに関係なくFCMonoiggで大幅に高いレベルがありました。2つの検出抗体を持つビーズセット間で観察される個人内の変動性は、1つのビーズセットで許容されると見られる抗原が他のビーズセットで受け入れられない可能性があり、候補者と潜在的に互換性のある移植を拒否する可能性があることが解明されます。

The accurate measurement of anti-HLA alloantibodies in transplant candidates is required for determining the degree of sensitization and for the listing of unacceptable antigens for organ allocation. Both the configuration of the HLA molecules coated on the beads and the nature of detection antibodies may impede assessment of the presence and strength of anti-HLA IgG- with the Luminex single-antigen-bead assay. Sera antibodies of the end-stage renal disease patients were compared using LIFECODES (LC) and LABScreen (LS) beadsets monitored with polyclonal-Fab (IgHPolyFab) and monoclonal-IgG (FcMonoIgG) second antibodies. Positive results at mean fluorescence intensity (MFI) > 500 (at serum dilution 1/10) were used to calculate panel reactive antibody (cPRA) levels. LS-beadsets are coated with monomeric variants in addition to intact HLA antigens with or without peptides, while LC-beadsets are devoid of monomeric variants and with lesser levels of peptide-free heterodimers. Consequently, IgG antibodies against both classes of HLA were reactive to more antigens with LS than with LC-beadsets. For both classes, MFIs were also frequently higher with LS than with LC. For HLA-I, MFIs were higher with IgHPolyFab than with FcMonoIgG with the exception of sera with MFIs > 5000 where they were comparable. For HLA-II, the reverse occurred, with significantly higher levels with FcMonoIgG regardless of the beadsets. The intraindividual variability observed between beadsets with two detection antibodies elucidates that antigens found as acceptable with one beadset may end up unacceptable with the other beadsets, with the possibility of denying potentially compatible transplants to candidates.