イワシ（Sardinops Sagax caerulea）からのトリプシンIの細菌包摂体からの再展開と活性化

背景：魚種のトリプシンは、潜在的なバイオテクノロジーの応用を見つける可能性のある冷たい攻撃酵素と見なされます。この作業では、モントレー・サルディン（サルデノプス・サガックス・カエルレア）からのトリプシンI（tryi）の再結合発現、繰り返しおよび活性化が報告されています。 方法：Tryiは、チオレドキシンを含むトリプシノゲンの融合タンパク質として、大腸菌BL21で過剰発現しました。トリプシノゲンIの繰り返しIは、Luria Broth培地あたり16.32 mgあたり16.32 mgの回収で細菌包含体の透析によって達成されました。 結果：活性化の前に、トリプシノゲン融合タンパク質はトリプシン活性を示しませんでした。トリプシノゲンIは、イワシのピロリックカエカ（非関節剤）から精製されたネイティブトリイの0.002 Uを加えることにより活性化されました。活性化された組換えトリプシンは、非関節剤トリプシン単独の3倍の活性を示しました。 結論：記載されているプロトコルにより、モントレーイワシ魚から十分な量の組換えTRYIを得ることができ、その冷たい適応パラメーターのさらに生化学的および生物物理学的特性評価が得られました。

BACKGROUND: Trypsin from fish species is considered as a cold-adapted enzyme that may find potential biotechnological applications. In this work, the recombinant expression, refolding and activation of Trypsin I (TryI) from Monterey sardine (Sardinops sagax caerulea) are reported. METHODS: TryI was overexpressed in Escherichia coli BL21 as a fusion protein of trypsinogen with thioredoxin. Refolding of trypsinogen I was achieved by dialysis of bacterial inclusion bodies with a recovery of 16.32 mg per liter of Luria broth medium. RESULTS: Before activation, the trypsinogen fusion protein did not show trypsin activity. Trypsinogen I was activated by adding 0.002 U of native TryI purified from the sardine pyloric caeca (nonrecombinant). The activated recombinant trypsin showed three times more activity than the nonrecombinant trypsin alone. CONCLUSION: The described protocol allowed obtaining sufficient amounts of recombinant TryI from Monterey sardine fish for further biochemical and biophysical characterization of its coldadaptation parameters.