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リリー研究所細胞ブタ腎臓1（LLC-PK1）細胞は、ヒトP糖タンパク質（LLC-PK1-P-gp）をトランスフェクトした細胞を輸送アッセイで広く使用して、この排出輸送体の基質として機能する薬物候補を特定します。LLC-PK1細胞で発現する内因性トランスポーターは、P-GPを介した輸送アッセイからの所見の解釈を複雑にする可能性があります。LLC-PK1細胞におけるP-GPを介した輸送アッセイにおけるブタ乳がん抵抗性タンパク質（BCRP）の影響を調査しました。ブタBCRP mRNAは、定量的RT-PCRによりLLC-PK1ワイルドタイプ（WT）とLLC-PK1-P-GP細胞の両方で検出されました。ブタBCRPの活性と衝撃を調査するために、LLC-PK1細胞の6つの典型的なBCRP基質を使用して輸送アッセイを実施しました。LLC-PK1 WT細胞の6 BCRP基質の排出比（ER）は2を超えており、BCRP阻害剤KO143の存在下で減少しました。6 BCRP基質の流出活性は、ヒトBCRPをトランスフェクトしたMDCKII細胞を使用して確認されました。プラゾシンとフルバスタチンの正味は、LLC-PK1-P-gp細胞のERSをLLC-PK1 WT細胞のものから除算することにより測定され、KO143の存在下では2を超えて増加しました。これらの結果は、LLC-PK1細胞の内因性BCRPがBCRP基質の輸送に関与しており、P-GP基質の同定を妨げる可能性があることを示しています。
リリー研究所細胞ブタ腎臓1（LLC-PK1）細胞は、ヒトP糖タンパク質（LLC-PK1-P-gp）をトランスフェクトした細胞を輸送アッセイで広く使用して、この排出輸送体の基質として機能する薬物候補を特定します。LLC-PK1細胞で発現する内因性トランスポーターは、P-GPを介した輸送アッセイからの所見の解釈を複雑にする可能性があります。LLC-PK1細胞におけるP-GPを介した輸送アッセイにおけるブタ乳がん抵抗性タンパク質（BCRP）の影響を調査しました。ブタBCRP mRNAは、定量的RT-PCRによりLLC-PK1ワイルドタイプ（WT）とLLC-PK1-P-GP細胞の両方で検出されました。ブタBCRPの活性と衝撃を調査するために、LLC-PK1細胞の6つの典型的なBCRP基質を使用して輸送アッセイを実施しました。LLC-PK1 WT細胞の6 BCRP基質の排出比（ER）は2を超えており、BCRP阻害剤KO143の存在下で減少しました。6 BCRP基質の流出活性は、ヒトBCRPをトランスフェクトしたMDCKII細胞を使用して確認されました。プラゾシンとフルバスタチンの正味は、LLC-PK1-P-gp細胞のERSをLLC-PK1 WT細胞のものから除算することにより測定され、KO143の存在下では2を超えて増加しました。これらの結果は、LLC-PK1細胞の内因性BCRPがBCRP基質の輸送に関与しており、P-GP基質の同定を妨げる可能性があることを示しています。
Lilly Laboratories cell porcine kidney 1 (LLC-PK1) cells transfected with human P-glycoprotein (LLC-PK1-P-gp) are widely used in transport assays to identify drug candidates that function as substrates of this efflux transporter. Endogenous transporters expressed in LLC-PK1 cells may complicate the interpretation of findings from P-gp-mediated transport assays. We investigated the impact of porcine breast cancer resistance protein (Bcrp) in P-gp-mediated transport assays in LLC-PK1 cells. Porcine Bcrp mRNA was detected in both LLC-PK1 wildtype (WT) and LLC-PK1-P-gp cells by quantitative RT-PCR. To investigate the activity and impact of porcine Bcrp, we conducted transport assays using 6 typical BCRP substrates in LLC-PK1 cells. Efflux ratios (ER) of the 6 BCRP substrates in LLC-PK1 WT cells were >2, and were reduced in the presence of the BCRP inhibitor Ko143. The efflux activities of the 6 BCRP substrates were confirmed using MDCKII cells transfected with human BCRP. Net ERs of prazosin and fluvastatin, dual substrates of P-gp and BCRP, determined by dividing ERs in LLC-PK1-P-gp cells by those in LLC-PK1 WT cells, were <2, but increased to >2 in the presence of Ko143. These results indicated that endogenous Bcrp in LLC-PK1 cells was involved in the transport of BCRP substrates and may interfere with the identification of P-gp substrates.
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