RNAにおけるN6-メチルアデノシン（M6 A）のマッピング：確立された方法、残りの課題、および新たなアプローチ

N6-メチルアデノシン（M6 A）は、真核生物mRNAで最も豊富な内部修飾です。特定のM6 Aリーダーと消しゴムのタンパク質は、この修飾をmRNA代謝の多くの側面にリンクし、そのレベルを動的な方法で調節します。したがって、さまざまな生物学的サンプルにおける正確な局在化と定量化は、M6 Aの機能的役割とその規制を支配するメカニズムを理解することに関連しています。このミニレビューでは、M6 Aマッピングの確立された新興概念を要約します。免疫沈降に基づいた独創的なM6 Aシーケンス手法から始めて、写真のクロスリンクと残りの課題により、技術的な改善を強調します。別の方法として、抗体を含まないアプローチが提示されます。これらには、野生型または操作されたM6 Aに敏感な酵素と化学的生物学的アプローチが含まれます。基質類似体、化学誘導体化、およびM6 Aを追跡するための酵素ステップを組み合わせたA。。

N6 -Methyladenosine (m6 A) is the most abundant internal modification in eukaryotic mRNA. Specific m6 A reader and eraser proteins link this modification to many aspects of mRNA metabolism and regulate its levels in a dynamic way. Precise localization and quantification in varying biological samples is, therefore, relevant to understand the functional role of m6 A and mechanisms governing its regulation. In this Minireview, we summarize established and emerging concepts for m6 A mapping. Starting with the seminal m6 A-sequencing techniques based on immunoprecipitation, we will highlight technical improvements by photo-cross-linking and remaining challenges. As an alternative, antibody-free approaches will be presented. These include wild-type or engineered m6 A-sensitive enzymes and chemical biology approaches combining substrate analogues, chemical derivatization, and enzymatic steps to trace m6 A. Finally, single-molecule sequencing as a new avenue for direct detection of mRNA modifications will be discussed.