インフルエンザAウイルスの検出およびH1およびH3のサブタイピングのための横方向のフローディップスティックによる逆転写リコンビナーゼポリメラーゼ増幅

横方向の流れディップスティック（RT-RPA-LFD）を使用した3つの逆転写リコンビナーゼポリメラーゼ増幅アッセイを開発し、マトリックスとヘマグルチニン（HA）遺伝子を同定して、インフルエンザAウイルスを検出し、サブタイプH1とH3を区別しました。アッセイの特異性の評価により、他のターゲットとの交差反応性がないことが示されました。それらの検出限界は、マトリックス遺伝子の反応ごとに123.6コピー、H1 HA遺伝子の反応ごとに677.1コピー、H3 HA遺伝子の112.2コピー/反応でした。RT-RPA-LFDアッセイでテストされた111のサンプルのうち、27はインフルエンザAウイルスで陽性であり、14はH1で陽性であり、10はH3で陽性でした。リアルタイムRT-PCRアッセイから得られた結果と比較して、RT-RPA-LFDアッセイの感度は、マトリックス、H1、およびH3の75％、93.33％、71.43％であり、100％特異性でした。RT-RPA-LFDアッセイの感度は、リアルタイムRT-PCRの感度よりも低く、従来のRT-PCRの感度よりも低く、RIDTよりもはるかに優れています。結論として、これらのアッセイは、リソース制限設定でインフルエンザAウイルス（サブタイプH1およびH3）を識別してサブタイピングするための効率的で信頼できるツールを提供します。

Three reverse transcription recombinase polymerase amplification assays with lateral flow dipsticks (RT-RPA-LFD) were developed for identification of the matrix and hemagglutinin (HA) genes to detect influenza A virus and distinguish subtypes H1 and H3. Assessment of the assays' specificity showed that there was no cross-reactivity with other targets. Their limits of detection were 123.6 copies per reaction for the matrix gene, 677.1 copies per reaction for the H1 HA gene, and 112.2 copies/reaction for the H3 HA gene. Of 111 samples tested by RT-RPA-LFD assays, 27 were positive for influenza A virus, 14 were positive for H1, and 10 were positive for H3. Compared to the results obtained from real-time RT-PCR assays, the sensitivity of RT-RPA-LFD assays was 75%, 93.33% and 71.43% for the matrix, H1, and H3, with 100% specificity. The sensitivity of RT-RPA-LFD assays is lower than that of real-time RT-PCR, comparable or better than that of conventional RT-PCR, and much better than that of RIDTs. In conclusion, these assays offer an efficient and reliable tool for identification and subtyping of influenza A virus (subtype H1 and H3) in the resource-limited setting.