Hotairは、NF-κB経路を阻害することにより、RAW2647細胞のOX-LDL誘発性炎症反応を緩和します

目的：アテローム性動脈硬化症の病因とその根本的なメカニズムの病因におけるHOX転写産物アンチセンス間RNA（Hotair）の可能な役割を調査する。 患者と方法：アテローム性動脈硬化症（AS）および健康なコントロールの末梢血リンパ球における熱気の発現は、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（QRT-PCR）によって検出されました。in vitroは、RAW264.7細胞におけるOX-LDL誘導によってモデルが確立されました。OX-LDL誘導後のRAW264.7細胞の生存率は、細胞カウントKIT-8（CCK-8）アッセイによって検出されました。RAW264.7細胞におけるTC（総コレステロール）、TG（トリグリセリド）、LDL-C（低密度リポタンパク質コレステロール）およびHDL-C（高密度リポタンパク質コレステロール）のレベルは、酵素関連免疫吸着剤アッセイ（ELISA）によって検出されました。Hotairの過剰発現プラスミドが構築されました。ELISAによるHotairの過剰発現後、TG、TC、LDL-C、およびHDLのレベルが再び検出されました。RAW264.7細胞のCD68+細胞およびCD168+細胞は、フローサイトメトリーによって検出されました。炎症誘発性および抗炎症遺伝子のタンパク質発現は、ウエスタンブロットによって検出されました。RAW264.7細胞の脂質代謝は、それぞれオイルレッドO染色とウエスタンブロットによって評価されました。最後に、開発としての規制におけるHotairの特定のメカニズムを調査するために、救助実験が実施されました。 結果：Hotairは、AS患者およびOx-LDLによって誘導されたRAW264.7細胞の末梢血リンパ球で低発現していました。Hotairの過剰発現は、脂肪遺伝子（PPARαおよびCPT-1）とダウンレギュレートされた脂質発生遺伝子（SREBP-1CおよびACS）の過剰発現。さらに、熱気の過剰発現は、炎症誘発性サイトカイン（TNF-αおよびIL-1β）の発現を減少させましたが、抗炎症性サイトカイン（IL-4およびIL-10）の発現を増加させました。モデルとしてのin vitroでは、FXR1はRAW264.7細胞で著しくダウンレギュレートされました。Hotairは、RAW264.7細胞のFXR1発現を促進することにより、炎症反応を減らしました。救助実験により、核因子カッパB（NF-κB）経路に対するHotairの効果がFXR1ノックダウンによって逆転したことが示されました。 結論：TairはAS患者として低い表現されていることがわかりました。Hotairの過剰発現は、NF-κB経路を介してFXR1を抑制することにより、脂質の蓄積を減らし、炎症反応を阻害する可能性があります。

OBJECTIVE: To investigate the possible role of hox transcript antisense intergenic RNA (HOTAIR) in the pathogenesis of atherosclerosis and its underlying mechanism. PATIENTS AND METHODS: The expression of HOTAIR in peripheral blood lymphocytes of atherosclerosis (AS) and healthy controls was detected by quantitative Real-time-polymerase chain reaction (qRT-PCR). In vitro AS model was established by ox-LDL induction in Raw264.7 cells. Viability of Raw264.7 cells after ox-LDL induction was detected by cell counting kit-8 (CCK-8) assay. Levels of TC (total cholesterol), TG (triglyceride), LDL-C (low density lipoprotein cholesterol) and HDL-C (high density lipoprotein cholesterol) in Raw264.7 cells were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Overexpression plasmid of HOTAIR was constructed. Levels of TG, TC, LDL-C, and HDL were detected again after HOTAIR overexpression by ELISA. CD68+ cells and CD168+ cells in Raw264.7 cells were detected by flow cytometry. Protein expressions of pro-inflammatory and anti-inflammatory genes were detected by Western blot. Lipid metabolism in Raw264.7 cells was evaluated by oil red O staining and Western blot, respectively. Finally, rescue experiments were conducted to explore the specific mechanism of HOTAIR in regulating AS development. RESULTS: HOTAIR was lowly expressed in peripheral blood lymphocytes of AS patients and Raw264.7 cells induced by ox-LDL. Overexpression of HOTAIR upregulated adipose genes (PPARα and CPT-1) and downregulated lipogenesis genes (SREBP-1c and ACS). Besides, overexpression of HOTAIR decreased expressions of pro-inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β), but increased expressions of anti-inflammatory cytokines (IL-4 and IL-10). In the in vitro AS model, FXR1 was remarkably downregulated in Raw264.7 cells. HOTAIR reduced inflammatory response via promoting FXR1 expression in Raw264.7 cells. Rescue experiments showed that the effect of HOTAIR on nuclear factor-kappa B (NF-κB) pathway was reversed by FXR1 knockdown. CONCLUSIONS: We found that TAIR was lowly expressed in AS patients. Overexpression of HOTAIR can reduce the lipid accumulation and inhibit inflammatory response by suppressing FXR1 via NF-κB pathway.