BH3プロファイリング：アポトーシスプライミングと依存関係を測定する機能的アッセイ

アポトーシス（プログラムされた細胞死）は、さまざまな細胞ストレスまたはin辱によって活性化され、適切な哺乳類の発達と生物の恒常性の維持に不可欠です。アポトーシス経路は、腫瘍の回帰または治療の毒性副作用に寄与する多くの一般的なタイプの抗がん療法とイオン化放射によっても関与しています。健康な細胞生存を維持することまたは癌細胞の効率的なクリアランスを維持することの重要性により、BH3プロファイリングアッセイは、任意の細胞のアポトーシス経路の状態を機能的に測定するために開発されました。このアッセイには、タンパク質のBcl-2ファミリーが存在し、アポトーシスへのコミットメントを制御する細胞ミトコンドリアの曝露が含まれます。活性化因子または増感剤ペプチドのいずれかを使用することにより、ミトコンドリアアポトーシスプライミングのレベル（細胞が細胞死にコミットする閾値に近い）または延期したBcl-2ファミリータンパク質への依存性を決定できます。ここで説明するBH3プロファイリングの2つの方法では、ユーザーがこれらの機能的測定を行うことができます。これは、プロのタンパク質の活性を阻害するプロアポトーシスストレッサーまたは治療薬（BH3ミメティクス）に対する細胞応答を予測するのに役立ちます。

Apoptosis (programmed cell death) is activated by a wide variety of cellular stresses or insults and is vital for proper mammalian development as well as the maintenance of organismal homeostasis. The apoptosis pathway is also engaged by many common types of anticancer therapies and ionizing radiation, which contributes to the regressions of tumors or the toxic side effects of treatment. Due to the importance of maintaining healthy cell survival or the efficient clearance of cancer cells, the BH3 profiling assay was developed to functionally measure the state of the apoptosis pathway in any given cells. This assay involves the exposure of cellular mitochondria, where the BCL-2 family of proteins resides and controls the commitment to apoptosis, to proapoptotic BH3 peptides that mimic the activity of endogenous proapoptotic proteins. By using either activator or sensitizer peptides, the level of mitochondrial apoptotic priming (proximity to the threshold at which a cell commits to cell death) or dependence on prosurvival BCL-2 family proteins can be determined. Described here are two methods of BH3 profiling that can enable a user to make these functional measurements, which can be useful for predicting cellular responses to proapoptotic stressors or therapeutics (BH3 mimetics) that inhibit the activity of prosurvival proteins.