新規フルオロヌクレオシドアナログNCCは、肝細胞モデルでラミブジン耐性B型肝炎ウイルスを阻害します

抗ウイルス薬耐性は、B型肝炎ウイルス（HBV）による慢性感染に対するラミブジンなどのヌクレオ（T）IDE類似体を使用した治療不全に寄与する最も重要な要因です。臨床的に耐性のあるHBV株の効率的な複製をサポートするシステムの開発が不可欠であり、薬物耐性HBV変異体の選択を防ぐために、新しい抗ウイルス薬が緊急に必要です。新規フッ素化シチジン類似体NCC（N-シクロプロピル-4'-アジド-2'-ジオキシ-2'-フルオロ-β-d-シチジン）は、最近、in vitroおよびin vivoでヒトHBVを強く阻害することが示されました。この研究は、ラミブジン耐性HBVに対するNCCの抗ウイルス活性を評価するために設計されました。ラミブジン耐性変異RTL180M/M204Vの主要なパターンをコードする安定した細胞株を生成し、「hepg2.rl1」と指定しました。免疫移動電子顕微鏡検査と酵素結合免疫吸着アッセイを使用して、HBV特異的粒子と抗原の分泌を検出しました。定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応によるHEPG2.RL1細胞の細胞外DNAおよび細胞内DNAの定量化により、野生型と比較して、それぞれ625倍および> 5556倍のラミブジンが5556倍>> 5556倍増加したことが明らかになりました。ウイルス。結果は、NCCが用量依存的に野生型またはラミブジン耐性HBVでのDNA複製とHBEAG産生を阻害したことを示しました。結論として、ラミブジン耐性HBVに対して活性化する抗ウイルス化合物のスクリーニングは、HEPG2.RL1細胞を使用して比較的容易に実行できます。NCCは、野生型HBVおよび臨床的ラミブジン耐性HBVに対する潜在的な抗ウイルス剤であり、HBV感染の治療の評価に値します。

Antiviral drug resistance is the most important factor contributing to treatment failure using nucleos(t)ide analogs such as lamivudine for chronic infection with hepatitis B virus (HBV). Development of a system supporting efficient replication of clinically resistant HBV strains is imperative, and new antiviral drugs are needed urgently to prevent selection of drug-resistant HBV mutants. A novel fluorinated cytidine analog, NCC (N-cyclopropyl-4'-azido-2'-deoxy-2'-fluoro-β-d-cytidine), was recently shown to strongly inhibit human HBV in vitro and in vivo. This study was designed to evaluate the antiviral activity of NCC against lamivudine-resistant HBV. We generated a stable cell line encoding the major pattern of lamivudine-resistant mutations rtL180M/M204V and designated it "HepG2.RL1". Immuno-transmission electron microscopic examination and enzyme-linked immunosorbent assay were used to detect secretion of HBV-specific particles and antigens. Quantification of extracellular DNA and intracellular DNA of HepG2.RL1 cells by quantitative real-time polymerase chain reaction revealed >625-fold and >5556-fold increases in the 50% inhibitory concentration of lamivudine, respectively, compared with that for the wild-type virus. The results showed that NCC inhibited DNA replication and HBeAg production in wild-type or lamivudine-resistant HBV in a dose-dependent manner. In conclusion, screening for antiviral compounds active against lamivudine-resistant HBV can be carried out with relative ease using hepG2.RL1 cells. NCC is a potential antiviral agent against wild-type HBV and clinical lamivudine-resistant HBV and deserves evaluation for the treatment of HBV infection.