レプチンは、ヒト歯髄線維芽細胞におけるレプチン受容体OB-RBを介してIL-6およびIL-8発現を誘導します

目的：レプチンは、その特別な受容体（OB-RB）への結合を通じて、免疫と炎症に強力な影響を及ぼします。この研究の目的は、HDPFSによるIL-6およびIL-8の炎症性サイトカインの産生に対するヒト歯科パルプ線維芽細胞（HDPFS）におけるレプチン受容体OB-RBの発現と、レプチンの効果を調査することを目的としています。 方法：OB-RB発現は、培養HDPFSの定量的リアルタイムPCR（リアルタイムPCR）、ウエスタンブロット、および免疫蛍光分析によって決定されました。小さな干渉RNA（siRNA）をHDPFSにトランスフェクトして、OB-RBの発現をダウンレギュレートしました。レプチン刺激HDPFSのIL-6およびIL-8レベルの炎症誘発性サイトカインを決定するために、リアルタイムPCRおよび酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）を使用しました。炎症性サイトカインのレプチン刺激産生を媒介する関与したシグナル伝達経路を、ウエスタンブロットおよび特定のシグナル伝達阻害剤分析を使用して調査しました。 結果：OB-RB mRNAとタンパク質の発現レベルは、HDPFSで検出されました。レプチンは、HDPFSにおけるIL-6およびIL-8のmRNAおよびタンパク質発現を濃度依存的かつ時間依存的に刺激する可能性があります。siRNA標的OB-RBを使用したトランスフェクションは、HDPFSによるIL-6およびIL-8発現の著しい減少をもたらしました。炎症誘発性サイトカインの発現の強化に従って、レプチン刺激は、HDPFSでSTAT3、p38 MAPK、ERK、およびAktの急速なリン酸化をもたらしました。JAK2/STAT3、P38 MAPKまたはPI3K/AKTを阻害すると、レプチン誘発IL-6産生が大幅に減少しましたが、ブロックERKおよびP38 MAPKはレプチン刺激HDPFからのIL-8産生を大幅に抑制しました。 結論：レプチンは、異なる細胞内シグナル伝達経路の活性化を介してHDPFSのOB-RBと結合することにより、IL-6およびIL-8産生をアップレギュレートする可能性があります。

OBJECTIVE: Leptin, through binding to its special receptor (Ob-Rb), has potent effects on immunity and inflammation. This study aimed to investigate the expression of leptin receptor Ob-Rb in human dental pulp fibroblasts (HDPFs) and the effects of leptin on the production of proinflammatory cytokines of IL-6 and IL-8 by HDPFs. METHODS: Ob-Rb expression was determined by quantitative real-time PCR (real-time PCR), Western blot and immunofluorescence analyses in cultured HDPFs. Small interfering RNA (siRNA) was transfected into HDPFs to down-regulate the expression of Ob-Rb. Real-time PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to determine the proinflammatory cytokines of IL-6 and IL-8 levels in leptin-stimulated HDPFs. The involved signalling pathways that mediate the leptin-stimulated production of proinflammatory cytokines were investigated using Western blot and specific signalling inhibitor analyses. RESULTS: The expression levels of Ob-Rb mRNA and protein were detected in HDPFs. Leptin could stimulate mRNA and protein expression of IL-6 and IL-8 in HDPFs in a concentration-dependent and time-dependent manner. Transfection with siRNA targeting Ob-Rb resulted in remarkable reduction of IL-6 and IL-8 expressions by HDPFs. In accordance with the enhanced expression of proinflammatory cytokines, leptin stimulation resulted in rapid phosphorylation of STAT3, p38 MAPK, ERK and Akt in HDPFs. Inhibiting JAK2/STAT3, p38 MAPK or PI3K/Akt substantially decreased leptin-induced IL-6 production, whereas blocking ERK and p38 MAPK substantially suppressed IL-8 production from leptin-stimulated HDPFs. CONCLUSIONS: Leptin may up-regulate IL-6 and IL-8 production through binding with Ob-Rb in HDPFs via the activation of different intracellular signalling pathways.