オートファジーの相関ライブセルイメージングと超解像度顕微鏡

オートファジーの相関的ライブセルイメージングと超解像度顕微鏡検査は、タイムラプス蛍光顕微鏡の時間分解能と超解像度顕微鏡の空間分解能を組み合わせて開発されました。蛍光タグに融合した関心のある組換えタンパク質を発現するHEK293細胞は、オートファゴソームの形成を捕捉するためにライブで画像化され、ステージ上でこれらの構造を「スナップフリーズ」に固定し、適切な抗体で染色され、直接確率的光学によってスーパー解像度で画像化されました再建顕微鏡。この章では、実験のセットアップと実行を支援する実用的なヒントと背景情報とともに、わかりやすいプロトコルを提供します。

Correlative live-cell imaging and super-resolution microscopy of autophagy was developed to combine the temporal resolution of time-lapse fluorescence microscopy with the spatial resolution of super-resolution microscopy. HEK293 cells that express recombinant proteins of interest fused to fluorescent tags are imaged live to capture the formation of autophagosomes, fixed on stage to "snap-freeze" these structures, stained with appropriate antibodies, relocated, and imaged at super resolution by direct stochastic optical reconstruction microscopy. This chapter provides an easy-to-follow protocol along with practical tips and background information to help set up and perform an experiment.