単一四重極質量分析と組み合わせた擬似二次元超パフォーマンス液体クロマトグラフィーを使用した呼吸液凝縮中のマロンジアルデヒドの定量化

2,4-ジニトロフェニルヒドラジン（DNPH）による誘導体化を介して、呼気凝縮液（EBC）におけるマロンジアルデヒド（MDA）の定量化のための堅牢な分析方法を開発しました。標的MDA-DNPHヒドラゾンは、2位の6ポートスイッチングバルブを介して単一亜耐性質量質量スペクトル計に相互接続された2つの反転相分析カラム（C18およびフェニルヘキシル）を使用して、超パフォーマンス液体クロマトグラフィーによって分離されました。ターゲット誘導体は、単一イオンモニタリングモード（ターゲット誘導体のm/z = 235、およびその標識同位体アナログでm/z = 237）を使用して正の電気散布イオン化の下で分析されました。この擬似2次元クロマトグラフィー分離は、標的誘導体の最適な分離条件を提供し、EBCサンプルで0.58nmの検出限界（OR 36.2pmolオンコラム量）を提供しました。キャリブレーションソリューションに基づいて、この方法の線形定量範囲は1.0〜200NM（R2 = 0.998）でした。この方法は、良好な相対回復（92.2-102.0％）と許容可能な精度（1日間精度で3.6-12.2％、5NMおよび25NM溶液から調製された2つの品質制御レベルの1日内精度で4.3-12.4％）を示しました。微分は、48時間または分析中に室温で安定していることがわかりました。この方法を使用して、学生アスリートの健康な集団から収集された205の呼気凝縮液サンプルを分析しました。MDAは、これらのサンプルの約95％で検出され、濃度は1.16〜149.63nmの範囲でした。濃度の中央値は6.82nmでした（IQR 4.08-9.88）。これらのデータは、私たちの方法を人口研究でMDAを測定するために成功裏に使用できることを示しています。

We developed a robust analytical method for quantification of malondialdehyde (MDA) in exhaled breath condensate (EBC) via derivatization with 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH). The target MDA-DNPH hydrazone was separated by ultra-performance liquid chromatography using two reversed-phase analytical columns (C18 and phenyl-hexyl) inter-connected via a two-position, six-port switching valve to a single-quadrupole mass spectrometer. The target derivative was analyzed under positive electrospray ionization using single ion monitoring mode (m/z = 235 for the target derivative, and m/z = 237 for its labeled isotopic analog). This pseudo two-dimensional chromatographic separation provided optimum separation conditions for the target derivative resulting in the limit of detection of 0.58 nM in EBC sample (or 36.2 pmol on-column amount), which is comparable to those reported previously using different techniques, including tandem mass spectrometry. Based on the calibration solutions, the method had a linear quantification range of 1.0-200 nM (r2 = 0.998). The method showed good relative recoveries (92.2-102.0%) and acceptable precisions (3.6-12.2% for inter-day precision, and 4.3-12.4% for intra-day precision for two quality control levels, prepared from 5 nM and 25 nM solutions). The derivative was found to be stable at room temperature for 48 h or during analysis. The method was used to analyze 205 exhaled breath condensate samples collected from individuals from a healthy population of student athletes. MDA was detected in approximately 95% of these samples, with concentrations ranging from 1.16 to 149.63 nM. The median concentration was 6.82 nM, (IQR 4.08-9.88). These data demonstrate that our method can be successfully used to measure MDA in population studies.