検証済みの液体クロマトグラフィー方法とバイオアッセイによるボツリヌス神経毒の含有量/能力評価A Type-A

ボツリヌス神経毒素型A（Bonta）は、Botrinum Clostridiumによって生成された7つの異なる血清型（A〜G）の1つです。安定性を示すサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）法が開発および検証され、特異性は強制分解研究、賦形剤の干渉、およびピーク純度によって確認されました。この方法は、バイオ医薬品のBontaの含有量と高分子量（HMW）の形態を評価するために適用され、結果をLD50マウスバイオアッセイの結果、T-47D細胞培養アッセイ、および逆相クロマトグラフィー（RPC）方法を比較し、平均値は0.71％高くなります。凝集した形態は、細胞毒性と生物活性の低下に有意な影響を示しました（P <0.05）。相関研究において、バイオテクノロジー由来の医薬品の無傷で変化した形態の分析のための最適化された分析技術と組み合わせて提案された方法の雇用により、各方法の能力の実証が可能になり、それによって彼らの安全で効果的な使用を保証しました。

Botulinum neurotoxin type-A (BoNTA) is one of the seven different serotypes (A to G) produced by Clostridium botulinum. A stability-indicating size-exclusion chromatography (SEC) method was developed and validated, and the specificity was confirmed by forced degradation study, interference of the excipients, and peaks purity. The method was applied to assess the content and high-molecular-weight (HMW) forms of BoNTA in biopharmaceutical products, and the results were compared with those of the LD50 mouse bioassay, the T-47D cell culture assay, and the reversed-phase chromatography (RPC) method, giving mean values of 0.71% higher, 0.36% lower, and 0.87% higher, respectively. Aggregated forms showed significant effects on cytotoxicity, as well as a decrease in the bioactivity (p < 0.05). The employment of the proposed method in conjunction with the optimized analytical technologies for the analysis of the intact and altered forms of the biotechnology-derived medicines, in the correlation studies, enabled the demonstration of the capability of each one of the methods and allowed for great improvements, thereby assuring their safe and effective use.