動物性食品（動物飼料、ペットフード、材料）におけるフルクタン（イヌリン、FOS、レバン、および分岐フルクタン）の決定：単一層検証、ファーストアクション201807

フルクタンの測定のための従来の酵素ベースの方法は、イヌリンと分岐型（アガベ）フルクタンのみを測定するように設計されました。採用された酵素、すなわちエキソ - イヌリナーゼとエンドイヌリナーゼは、レバンの不完全な加水分解を与えます。Levan加水分解には、3番目の酵素であるエンドレバナーゼが必要です。このホワイトペーパーでは、さまざまな動物飼料やペットフードであらゆる種類のフルクタン（イヌリン、レバン、分岐）を決定するための方法と商業テストキット（Megazyme Fructanアッセイキット）について説明します。この方法は、純粋なイヌリン、リュウゼツラン・フルクタン、レバン、およびフルクタンを含むサンプルの範囲を分析するために、単一の研究室で検証されています。定量化は、エキソイヌリナーゼ、エンドイヌリナーゼ、エンドレバナーゼの混合物によるフルクトンとフルクトースとグルコースの完全な加水分解に基づいており、その後、フルクトースとフルクトースと同じ色の応答を与えるPahbah還元糖法を使用したこれらの糖の測定に基づいています。グルコース。フルクタンの加水分解の前に、サンプルのショ糖と澱粉を干渉していることは、特異的に加水分解され、ホウ酸水産児の減少によって除去されます。この文書で概説されている単一手作業の検証（SLV）は、市販のイヌリン（Raftiline）とアゴベフルクタン（Frutafit®）で実行されました。大麦粉は、そのうちの1つ（BarleyMax®）は、植物繁殖を通じてフルクタンで遺伝的に濃縮されました。検証中に調査されたパラメーターには、作業範囲、ターゲット選択性、回復、LOD、LOQ、真実（バイアス）、精度（再現性と中間精度）、堅牢性、および安定性が含まれます。この方法は、堅牢で、迅速で、シンプルです。

Traditional enzyme-based methods for measurement of fructan were designed to measure just inulin and branched-type (agave) fructans. The enzymes employed, namely exo-inulinase and endo-inulinase, give incompletely hydrolysis of levan. Levan hydrolysis requires a third enzyme, endo-levanase. This paper describes a method and commercial test kit (Megazyme Fructan Assay Kit) for the determination of all types of fructan (inulin, levan, and branched) in a variety of animal feeds and pet foods. The method has been validated in a single laboratory for analysis of pure inulin, agave fructan, levan, and a range of fructan containing samples. Quantification is based on complete hydrolysis of fructan to fructose and glucose by a mixture of exo-inulinase, endo-inulinase, and endo-levanase, followed by measurement of these sugars using the PAHBAH reducing sugar method which gives the same color response with fructose and glucose. Before hydrolysis of fructan, interfering sucrose and starch in the sample are specifically hydrolyzed and removed by borohydride reduction. The single-laboratory validation (SLV) outlined in this document was performed on commercially available inulin (Raftiline) and agave fructan (Frutafit®), levan purified from Timothy grass, two grass samples, a sample of legume hay, two animal feeds and two barley flours, one of which (Barley MAX®) was genetically enriched in fructan through plant breeding. Parameters examined during the validation included working range, target selectivity, recovery, LOD, LOQ, trueness (bias), precision (repeatability and intermediate precision), robustness, and stability. The method is robust, quick, and simple.