T4 DNAリガーゼを使用したバックボーン修飾オリゴヌクレオチドの酵素合成

特定の混雑剤の高濃度のT4 DNAリガーゼと共同体は、化学的に得るのが困難な一連の骨格化されたオリゴヌクレオチドの合成を触媒します。バックボーン修飾核酸は、しばしば酵素的および化学的に安定しているため、潜在的な診断剤または治療薬として、バイオセーフティツールとして、またはナノテクノロジーで興味深いものになります。この記事では、3 mのベタインと10％PEG 8000の存在下で修飾オリゴヌクレオチドのライゲーション反応の効率を調べるための小規模な実験について説明し、その後に結晶化したオリゴヌクレオチドの分離を伴う大規模なライゲーションが続きます。正しい製品形成は、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動と質量分析を使用して検証できます。©2019 by John Wiley＆Sons、Inc。

T4 DNA ligase in high concentrations of certain crowding agents and cosolutes catalyzes the synthesis of a series of backbone-modified oligonucleotides that are difficult to obtain chemically. Backbone-modified nucleic acids are often enzymatically and chemically more stable, making them interesting as potential diagnostic or therapeutic agents, as a biosafety tool, or in nanotechnology. In this article, we describe a small-scale experiment to probe the efficiency of the ligation reaction of modified oligonucleotides in the presence of 3 M betaine and 10% PEG 8000, followed by large-scale ligation with subsequent isolation of the ligated oligonucleotide. The correct product formation can be verified using denaturing polyacrylamide gel electrophoresis and mass spectrometry. © 2019 by John Wiley & Sons, Inc.