LPS除去されたE COLIからの生物活性ヒトリポ多糖結合タンパク質のワンステップ産生

ヒトリポ多糖（LPS）結合タンパク質（LBP）は、外膜のLPSの認識によりグラム陰性菌の侵入に対して強力な自然免疫を媒介する約60kDAグリコシル化タンパク質です。現在までに、原核生物発現システムを通じて十分な量で生物活性LPSを含まないLBPを効率的に生成する方法はありません。ここでは、ClearColi BL21（DE）3という名前のLPS除去菌株からのヒトLBPを迅速に調製するための簡単なアプローチを提示します。超高親和性CL7/IM7精製システムの使用と組み合わせて、LB培地を使用すると、〜4mg/Lの収量で90％以上の純度で組換えヒトLBPの1段階の精製を達成しました。生成されたLBPは、蛍光分光法と等温滴定熱量測定（ITC）によって検証された完全なLPS結合活性を保持します。総称して、LPSを含まないタンパク質を費用効果的に生成および浄化するために適用できる有効な方法を開発します。

Human lipopolysaccharide (LPS) binding protein (LBP) is a ∼60 kDa glycosylated protein that mediates potent innate immune against invading Gram-negative bacteria by recognition of LPS in their outer membranes. To date, there is no method for efficient production of bioactive LPS-free LBP at sufficient amounts through prokaryotic expression system. Here we present a simple approach for rapid preparation of human LBP from a LPS-eliminated E. coli strain named ClearColi BL21 (DE)3. Combined with the usage of an ultra-high-affinity CL7/Im7 purification system, we achieved one-step purification of recombinant human LBP with over 90% purity at a yield of ∼4 mg/L when using LB culture medium. The produced LBP retains full LPS binding activity which was validated by fluorescence spectroscopy and isothermal titration calorimetry (ITC). Collectively, we develop a valid method that can be applied to cost-effectively produce and purify LPS-free proteins.