大腸菌の未使用および融合タンパク質の発現に役立つ厳密に調節されたTACプロモーターベクター

大腸菌の遺伝子の調節された発現のために、一連の新しいプラスミド発現ベクター（PTRCシリーズ）が構築されています。PKK233-2 [Amann and Brosius、Gene 40（1985）183-190]に基づいて、ベクターには強力なハイブリッドTRP/LACプロモーター、LACZリボソーム結合部位（RBS）、PUC18およびRRNBの複数のクローニング部位があります。転写ターミネーター。合成オリゴデオキシノクレオチドの助けを借りて、複数のクローニング部位が3つの読み取りフレームでNCOIサイトの後ろに挿入されています。したがって、ベクターは、（NCOI部位を使用することにより）本物の非融合形態でのタンパク質の発現と、融合タンパク質の発現（正しい翻訳フレームのクローニング部位のいずれかを選択することにより）に等しく役立ちます。宿主株の構造と成長中のハイブリッドTRP/LACプロモーターの完全な抑制を確保するために、LACリプレッサー遺伝子のLaciq対立遺伝子をベクターの一部に加えました。完全なベクターヌクレオチド配列と、新しいベクトルを含む異種遺伝子発現（ヒト凝固因子xiiiaおよびヒト胎盤抗凝固タンパク質Pp4）の例を示します。

A series of new plasmid expression vectors (the pTrc series) has been constructed for the regulated expression of genes in Escherichia coli. Based on pKK233-2 [Amann and Brosius, Gene 40 (1985) 183-190], the vectors carry a strong hybrid trp/lac promoter, the lacZ ribosome-binding site (RBS), the multiple cloning site of pUC18 and the rrnB transcription terminators. With the aid of synthetic oligodeoxynucleotides, the multiple cloning site has been inserted behind an NcoI site in three reading frames. Thus, the vectors are equally useful for the expression of proteins in their authentic, non-fused form (by using the NcoI site) and for the expression of fusion proteins (by choosing any of the cloning sites in the correct translational frame). To ensure complete repression of the hybrid trp/lac promoter during construction and growth in any host strain, the lacIq allele of the lac repressor gene was added to some of the vectors. The complete vector nucleotide sequence and examples of heterologous gene expression (human coagulation factor XIIIa and human placental anticoagulant protein PP4) with the new vectors are presented.